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daringhong

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR后电泳无结果 已有4人参与

最近做古菌PCR,PCR后进行电泳检测,除marker有清晰的条带外,样品全部没有条带,并且连引物二聚体也没有。想请问各位大虾,这会是什么原因呢?
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每天进步一点点~~
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临风7071

木虫 (正式写手)


daringhong(金币+1):谢谢参与
dhd997:编辑内容 2010-10-12 21:19
引用回帖:
Originally posted by daringhong at 2010-10-12 19:46:10:
最近做古菌PCR,PCR后进行电泳检测,除marker有清晰的条带外,样品全部没有条带,并且连引物二聚体也没有。想请问各位大虾,这会是什么原因呢?

请做阳性对照

[ Last edited by dhd997 on 2010-10-12 at 21:19 ]
2楼2010-10-12 20:26:14
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

★ ★
daringhong(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-12 21:20:17
引用回帖:
Originally posted by daringhong at 2010-10-12 19:46:10:
最近做古菌PCR,PCR后进行电泳检测,除marker有清晰的条带外,样品全部没有条带,并且连引物二聚体也没有。想请问各位大虾,这会是什么原因呢?

PCR的时候做阴阳性对照。阴性对照排除污染,阳性对照判断你的体系有没有问题。如果你的阳性对照都没有条带的话,仔细检查一下是不是忘记加什么东西了?或者是条件不合适等等之类的因素~~
我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
3楼2010-10-12 20:44:22
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)


daringhong(金币+1):谢谢参与
排除PCR本身的原因外,那肯定是引物设计有问题了啊。
4楼2010-10-12 21:27:57
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犹寒

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢参与` 2010-10-13 08:50:50
我觉得你应该先确定pcr的模板到底有没有,纯不纯,如果模板放了很久,DNA可能会降解
5楼2010-10-13 08:48:37
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只顾登攀2012

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能引物加少了,或者PCR扩增不成功,建议做阳性对照
只顾攀登莫问高,每天踏实而过,对未来充满希望!!!
6楼2010-10-13 14:28:44
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daringhong

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 临风7071 at 2010-10-12 20:26:14:

请做阳性对照

[ Last edited by dhd997 on 2010-10-12 at 21:19 ]

呵呵,谢谢,已经找到原因了。是PCR体系除出了问题~~
每天进步一点点~~
7楼2010-10-13 19:48:44
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green1223

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计是缓冲液少了 没通电  哈哈
8楼2010-11-04 22:22:07
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