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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切后没有目的带
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Zwy520533

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切后没有目的带 已有1人参与

cd40-t18用BamH1和Bsa1大酶切后，跑胶完全没有目的带，为什么？只有载体片段，没有目的基因片断？

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1楼 2016-03-05 23:27:42
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Zwy520533

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-06 21:37:40
你是验证正确的克隆，又重新转接的对吧，你目的条带大小多少呢？
...

400多bp

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8楼2016-03-06 21:52:15
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jackyoung

新虫 (正式写手)
切下来应该多大？如果片段大小小于载体很多，而小片段整体量不够会造成无法检测。

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CestLaVie
2楼2016-03-06 09:10:18
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Zwy520533

新虫 (初入文坛)
量不够怎么办啊，多切呗？那有的时候只有目的片段没有载体怎么回事

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3楼2016-03-06 09:12:37
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
额，都是问号，到底是什么条带都没有，还是只有载体条带呢？首先，你这是挑的克隆子在做验证么，没有目的片段不就是阴性克隆么，重新挑取转化子验证。其次，可以结合pcr的方法来辅助酶切结果，如果是质粒浓度低导致检测不到，则pcr相对更灵敏些，如果pcr验证正确，那基本就是你质粒抽提的问题了，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-03-06 09:19:54
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