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北化方华

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒重组后双酶切没有条带,求大神帮忙分析一下 已有1人参与

最近在做质粒重组,质粒用的PYES2,约6kb,目的基因2500kb,重组转化后提质粒有三条带,做单酶切验证大小在8kb以上,做双酶切没有条带,分开酶切第一个酶切开后有条带,胶回收后用第二个酶切什么都没有,两小时四小时都没有?不知道是什么原因,是没有转进去吗?还是酶切条件不当。
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-23 12:32:54
单酶切出现8K的条带,证明已经转进去了。你第二次酶切之后没东西,可以考虑酶或buffer的问题,还有酶切时使用的枪头,无菌水等等有没有被污染。
2楼2014-10-23 11:19:05
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