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北化方华

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒重组后双酶切没有条带，求大神帮忙分析一下已有1人参与

最近在做质粒重组，质粒用的PYES2，约6kb，目的基因2500kb，重组转化后提质粒有三条带，做单酶切验证大小在8kb以上，做双酶切没有条带，分开酶切第一个酶切开后有条带，胶回收后用第二个酶切什么都没有，两小时四小时都没有？不知道是什么原因，是没有转进去吗？还是酶切条件不当。

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1楼 2014-10-22 21:22:22

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caihang

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-23 12:32:54

单酶切出现8K的条带，证明已经转进去了。你第二次酶切之后没东西，可以考虑酶或buffer的问题，还有酶切时使用的枪头，无菌水等等有没有被污染。

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