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Zwy520533

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切后没有目的带 已有1人参与

cd40-t18用BamH1和Bsa1大酶切后,跑胶完全没有目的带,为什么?只有载体片段,没有目的基因片断?

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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Zwy520533 at 2016-03-06 21:33:40
是这样的,我用连接了T18载体的目的基因,做转化,测序正确。然后提的质粒,然后进行酶切,先用BamH1再用bsa1,跑胶之后胶回收,做了4次,要么只有目的带,要么只有载体带,要么都有,但是目的带很浅,根本回收不回 ...

你是验证正确的克隆,又重新转接的对吧,你目的条带大小多少呢?

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
6楼2016-03-06 21:37:40
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jackyoung

新虫 (正式写手)

切下来应该多大?如果片段大小小于载体很多,而小片段整体量不够会造成无法检测。

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CestLaVie
2楼2016-03-06 09:10:18
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Zwy520533

新虫 (初入文坛)

量不够怎么办啊,多切呗?那有的时候只有目的片段没有载体怎么回事

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3楼2016-03-06 09:12:37
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
额,都是问号,到底是什么条带都没有,还是只有载体条带呢?首先,你这是挑的克隆子在做验证么,没有目的片段不就是阴性克隆么,重新挑取转化子验证。其次,可以结合pcr的方法来辅助酶切结果,如果是质粒浓度低导致检测不到,则pcr相对更灵敏些,如果pcr验证正确,那基本就是你质粒抽提的问题了,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-06 09:19:54
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