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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切问题
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题

pET-28a质粒，带有Xba1和Sca1酶切位点，
100微升体系，用Sca1 2ou酶切3h后，乙醇沉淀后，再用Xba1 2ou切3h，只看见切出来的线性带（就是有的目的带）但是没有看到大片载体带，成糊状的。
用的酶是fermentas的酶。请问各位大侠有没有遇到这样的情况。
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1楼 2011-11-02 12:50:25
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zhunning

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

既然得到目的条带了，割胶回收不就得了
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2楼2011-11-02 15:04:14
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhunning at 2011-11-02 15:04:14:
既然得到目的条带了，割胶回收不就得了

那我表述有问题，目的条带是双酶切剩下的，我要的是载体。。。。
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3楼2011-11-03 17:00:16
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good 2011-11-05 22:02:48
用两种酶分别单酶切载体，跑胶看能否都是得到单一的条带
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-03 18:55:05
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-11-03 18:55:05:
用两种酶分别单酶切载体，跑胶看能否都是得到单一的条带

会产生很严重的拖尾。
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5楼2011-11-04 23:39:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 也可以看看酶过期了没有。 2011-11-05 22:03:15
引用回帖:
5楼: Originally posted by sayfxxk2u at 2011-11-04 23:39:47:
会产生很严重的拖尾。

如果可以换个其他公司的酶切切试试，如果还是这样就是质粒的问题
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2011-11-05 11:55:15
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mayonghong

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助。能双酶切的话还是双酶切省事！ 2011-11-05 22:03:44
sayfxxk2u(金币+1): 谢谢，加大体系，乙醇沉淀可能有影响，加大量试试吧。 2011-11-23 21:52:24
这两种酶可以在buffer3中，37度同时酶切质粒啊，但是Xba1得酶切效率只有75%，你可以延长酶切时间，但是这总比你做的要省事的多啊，你可以尝试一下
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一生有你
7楼2011-11-05 21:00:04
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mayonghong at 2011-11-05 21:00:04:
这两种酶可以在buffer3中，37度同时酶切质粒啊，但是Xba1得酶切效率只有75%，你可以延长酶切时间，但是这总比你做的要省事的多啊，你可以尝试一下

Fermentas 的Sca1是Sca1的专有buffer，Xba 1是buffer Tango，不是一样的，你说的是TAKARA的吧。回头试试
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8楼2011-11-06 13:15:02
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-11-05 11:55:15:
如果可以换个其他公司的酶切切试试，如果还是这样就是质粒的问题

可能切的时间过长，又酶过量，会切出拖尾，那换个公司的试试。
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9楼2011-11-06 13:16:40
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