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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切问题
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题

pET-28a质粒，带有Xba1和Sca1酶切位点，
100微升体系，用Sca1 2ou酶切3h后，乙醇沉淀后，再用Xba1 2ou切3h，只看见切出来的线性带（就是有的目的带）但是没有看到大片载体带，成糊状的。
用的酶是fermentas的酶。请问各位大侠有没有遇到这样的情况。
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1楼 2011-11-02 12:50:25
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-11-05 11:55:15:
如果可以换个其他公司的酶切切试试，如果还是这样就是质粒的问题

可能切的时间过长，又酶过量，会切出拖尾，那换个公司的试试。
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9楼2011-11-06 13:16:40
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zhunning

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

既然得到目的条带了，割胶回收不就得了
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2楼2011-11-02 15:04:14
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhunning at 2011-11-02 15:04:14:
既然得到目的条带了，割胶回收不就得了

那我表述有问题，目的条带是双酶切剩下的，我要的是载体。。。。
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3楼2011-11-03 17:00:16
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good 2011-11-05 22:02:48
用两种酶分别单酶切载体，跑胶看能否都是得到单一的条带
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-03 18:55:05
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