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新虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题

pET-28a质粒，带有Xba1和Sca1酶切位点，
100微升体系，用Sca1 2ou酶切3h后，乙醇沉淀后，再用Xba1 2ou切3h，只看见切出来的线性带（就是有的目的带）但是没有看到大片载体带，成糊状的。
用的酶是fermentas的酶。请问各位大侠有没有遇到这样的情况。

1楼 2011-11-02 12:50:25

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铜虫 (初入文坛)

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助。能双酶切的话还是双酶切省事！ 2011-11-05 22:03:44
sayfxxk2u(金币+1): 谢谢，加大体系，乙醇沉淀可能有影响，加大量试试吧。 2011-11-23 21:52:24

这两种酶可以在buffer3中，37度同时酶切质粒啊，但是Xba1得酶切效率只有75%，你可以延长酶切时间，但是这总比你做的要省事的多啊，你可以尝试一下

一生有你

7楼2011-11-05 21:00:04

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