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提取质粒出现杂条带。
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大家好。我将我的目的片段3000bp 连入我的载体7000bp。连接方式是单酶切连接。载体经过去磷酸化处理。提取质粒后跑出来的电泳图如图所示。 提取质粒之前已经做过菌落PCR。所以这次是将菌落PCR得到的阳性菌进行抽提质粒。发现质粒的位置五花八门。有的比对照质粒还要小。有的还有很多条带。 不知道怎么回事。 第一道为7000bp对照质粒。  捕获.PNG |
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b6122
木虫 (正式写手)
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6楼2015-07-07 03:48:06
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
朱振刚: 金币+1 2015-07-05 17:04:27
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
朱振刚: 金币+1 2015-07-05 17:04:27
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第一，质粒电泳出现三条带，很正常，最快的那条是质粒超螺旋，中间的是质粒本身，最慢的是质粒的复制中间体。 第二，目的质粒应该是10000bp，我看第三泳道可以考虑测序下。 第三，不知道你菌落pcr用的是什么引物。单酶切一般引物是要用质粒上的一条和目的基因上的一条引物进行pcr反应的。 第四，酶切之后可能马上又自己连回去了，或者去磷酸化不完全，都是载体自连的可能原因。 第五，很前面的那条带不知道是啥质粒，会不会你的3000bp中有复制子，3000bp的自连了呢。或者，你的酶加多了，信号活性，乱切。 |
2楼2015-07-05 15:10:23
3楼2015-07-05 15:12:39
4楼2015-07-05 17:08:04
