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朱振刚

新虫 (小有名气)

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[交流] 提取质粒出现杂条带。

大家好。我将我的目的片段3000bp 连入我的载体7000bp。连接方式是单酶切连接。载体经过去磷酸化处理。提取质粒后跑出来的电泳图如图所示。
提取质粒之前已经做过菌落PCR。所以这次是将菌落PCR得到的阳性菌进行抽提质粒。发现质粒的位置五花八门。有的比对照质粒还要小。有的还有很多条带。不知道怎么回事。
第一道为7000bp对照质粒。

捕获.PNG

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越努力越幸运

1楼 2015-07-04 20:26:53

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朱振刚

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引用回帖:

2楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-07-05 05:10:23
第一，质粒电泳出现三条带，很正常，最快的那条是质粒超螺旋，中间的是质粒本身，最慢的是质粒的复制中间体。
第二，目的质粒应该是10000bp，我看第三泳道可以考虑测序下。
第三，不知道你菌落pcr用的是什么引物。 ...

谢谢你的解答。很详细。
我菌落PCR两条引物分别是载体上的和目的片段上的。为了排除目的片段连反的可能性，所以我有针对性的选择了引物。
还有。我这个载体是用来做表达的。我担心会不会有连正的载体和连反的载体一同进入菌体进行表达呢？
我已经将1,2,3,4号质粒送出去测序了。现在等待测序结果呢。