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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 提取的质粒中的杂带不知道是什么
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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 提取的质粒中的杂带不知道是什么 已有2人参与

如图，左侧是所提取的构建好含有目的基因的载体，中间的是Marker III（从上到下条带为4500bp，3000，2000），右侧的为空载体，不知道为什么左侧的质粒电泳中有三条条带，构建好的载体在17kb左右，而质粒电泳中的最亮条带在2kb~3kb之间，不知道这条特亮的条带是什么，望各位大侠帮忙分析一下，谢谢！

提取的质粒中的杂带不知道是什么
图片2.jpg
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认真是一种习惯
1楼 2014-07-19 10:29:53
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zmj521good: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-19 17:55:46
那个特亮估计是杂dna，可能载体降解了。17kb的载体跑的慢，

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-07-19 13:52:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zmj521good: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-19 17:55:56
找个只有一个酶切位点的酶单切。看看是不是最后一条带。
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3楼2014-07-19 17:41:04
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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-19 17:41:04
找个只有一个酶切位点的酶单切。看看是不是最后一条带。

单酶切了，还是有那条最亮的条带，附下图。左侧为1kb Marker（从下到上一次为1kb, 2kb, 3kb, 4kb, 5kb, 6kb, 7kb, 8kb, 10kb），右侧为质粒单酶切图，最上侧的应该为目的质粒，但是还是不知道最亮的条带是什么。
提取的质粒中的杂带不知道是什么-1
图片1.jpg
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认真是一种习惯
4楼2014-07-19 17:58:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★ ★
zmj521good(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:45:56
引用回帖:
4楼: Originally posted by zmj521good at 2014-07-19 17:58:48
单酶切了，还是有那条最亮的条带，附下图。左侧为1kb Marker（从下到上一次为1kb, 2kb, 3kb, 4kb, 5kb, 6kb, 7kb, 8kb, 10kb），右侧为质粒单酶切图，最上侧的应该为目的质粒，但是还是不知道最亮的条带是什么。

...

你这个单酶切的酶是一个单独的酶切位点，切出来2条带，这只能说明你这个质粒提污染了吧。而且你的约3000左右的那条亮带一直是那么大，没有被切开。
如果你是为了酶切得到片段或者载体，你就试着酶切一下，看看3000左右的带是否还在。   如果还在，你就直接切你需要的带回收就行了。
或者，把质粒回收，再转一次DH5a，再提质粒，就不会有3000的带了。
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5楼2014-07-22 10:51:49
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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-22 10:51:49
你这个单酶切的酶是一个单独的酶切位点，切出来2条带，这只能说明你这个质粒提污染了吧。而且你的约3000左右的那条亮带一直是那么大，没有被切开。
如果你是为了酶切得到片段或者载体，你就试着酶切一下，看看300 ...

谢谢你的建议，这就是我要的质粒，不需要后续的酶切或者其他操作了，我现在已经尝试回收质粒了。
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认真是一种习惯
6楼2014-07-22 18:50:05
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zmj521good at 2014-07-22 18:50:05
谢谢你的建议，这就是我要的质粒，不需要后续的酶切或者其他操作了，我现在已经尝试回收质粒了。...

恩
7楼2014-07-24 09:37:07
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