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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 提取的质粒中的杂带不知道是什么 已有2人参与

如图,左侧是所提取的构建好含有目的基因的载体,中间的是Marker III(从上到下条带为4500bp,3000,2000),右侧的为空载体,不知道为什么左侧的质粒电泳中有三条条带,构建好的载体在17kb左右,而质粒电泳中的最亮条带在2kb~3kb之间,不知道这条特亮的条带是什么,望各位大侠帮忙分析一下,谢谢!

提取的质粒中的杂带不知道是什么
图片2.jpg
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认真是一种习惯
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-19 17:55:56
找个只有一个酶切位点的酶单切。看看是不是最后一条带。
3楼2014-07-19 17:41:04
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-19 17:55:46
那个特亮估计是杂dna,可能载体降解了。17kb的载体跑的慢,

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-19 13:52:39
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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-19 17:41:04
找个只有一个酶切位点的酶单切。看看是不是最后一条带。

单酶切了,还是有那条最亮的条带,附下图。左侧为1kb Marker(从下到上一次为1kb, 2kb, 3kb, 4kb, 5kb, 6kb, 7kb, 8kb, 10kb),右侧为质粒单酶切图,最上侧的应该为目的质粒,但是还是不知道最亮的条带是什么。
提取的质粒中的杂带不知道是什么-1
图片1.jpg

认真是一种习惯
4楼2014-07-19 17:58:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

★ ★
zmj521good(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:45:56
引用回帖:
4楼: Originally posted by zmj521good at 2014-07-19 17:58:48
单酶切了,还是有那条最亮的条带,附下图。左侧为1kb Marker(从下到上一次为1kb, 2kb, 3kb, 4kb, 5kb, 6kb, 7kb, 8kb, 10kb),右侧为质粒单酶切图,最上侧的应该为目的质粒,但是还是不知道最亮的条带是什么。

...

你这个单酶切的酶是一个单独的酶切位点,切出来2条带,这只能说明你这个质粒提污染了吧。而且你的约3000左右的那条亮带一直是那么大,没有被切开。
如果你是为了酶切得到片段或者载体,你就试着酶切一下,看看3000左右的带是否还在。   如果还在,你就直接切你需要的带回收就行了。
或者,把质粒回收,再转一次DH5a,再提质粒,就不会有3000的带了。
5楼2014-07-22 10:51:49
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