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天宇201266

金虫 (正式写手)

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[求助] pET-28a质粒被Hind III和Xho I 双酶切之后没有条带，而这两个酶分别单酶切却都有条带已有1人参与

如题：pET-28a质粒被Hind III和Xho I 这两个酶分别单酶切都有一条带，而用这两个酶进行双酶切时却总是切不开，条带很弥散，跟刷子刷的一样，

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在路上。。。

1楼2015-06-18 08:48:52

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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

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检查一下双酶切的条件，两个酶的体积和有没有低于总体积的10%。我通常两个酶各1ul，总体积50ul。因为甘油浓度高抑制酶活性。而枪头外侧吸附的酶体积也不要忽视。

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慎思明辨博学笃行

2楼2015-06-18 11:39:08

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