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惰惰228

银虫 (小有名气)

[求助] 构建载体 待插入片段本身就是pcr凝胶回收产物 酶切后还需要再凝胶回收用于连接吗 已有4人参与

打算构建一个载体,待插入片段本身就是OE-PCR产物,因有非特异扩增 进行了凝胶回收;
然后载体和片段分别限制性酶切;
载体进行纯化(酚氯仿抽提)后用于连接,
片段通常需要进行凝胶回收后用于连接,
但我这种情况,还需要再次凝胶回收吗?还是可以和载体一起进行纯化?
请有经验的大侠指导!
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惰惰228

银虫 (小有名气)

T载体实验室都不用,没有经验。
或者pcr产物 先纯化 再酶切 再回收呢?只回收一次。两端加了保护碱基了倒是。
我的pcr产物杂带多,有点烦。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2015-06-21 09:15:31
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
惰惰228: 金币+1 2015-06-18 01:13:15
酶切后需要做切胶回收纯化,连接片段的纯度会影响连接效率。
2楼2015-06-17 10:47:14
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惰惰228

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-17 10:47:14
酶切后需要做切胶回收纯化,连接片段的纯度会影响连接效率。

可以做用pcr产物纯化试剂盒进行纯化么?还有必要再电泳、切胶回收吗?
原来你也在这里
3楼2015-06-18 00:47:43
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


惰惰228: 金币+1 2015-06-23 22:38:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by 惰惰228 at 2015-06-18 00:47:43
可以做用pcr产物纯化试剂盒进行纯化么?还有必要再电泳、切胶回收吗?...

我上次理解有误。可以用PCR产物纯化试剂盒纯化。切掉的两头的保护碱基一般洗脱时就被洗掉了。
4楼2015-06-18 12:19:03
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