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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 切胶回收100bp的片段，回收后跑电泳没有条带
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spirit_free

金虫 (小有名气)

[求助] 切胶回收100bp的片段，回收后跑电泳没有条带 已有9人参与

如题，PCR得到的产物约100bp，将目的片段切胶回收后进行酶切，酶切后跑电泳目的条带很亮，但是再将酶切后的目的片段切胶回收，跑电泳发现没有条带，同时做的2000多bp的片段没有问题，重复3次都是这种现象，求各位大神帮忙分析下原因~~
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1楼 2015-01-03 23:25:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yzj926521

新虫 (小有名气)

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★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-04 12:50:43
回收2000bp和100bp中间步骤是有差别的，用于回收大片段的试剂盒回收小片段时需要有异丙醇处理一步的，或者你用专门用于小片段回收的盒子来做
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3楼2015-01-04 08:56:49
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普通回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-04 12:50:39
严格按照试剂盒操作应该没问题的 仔细看一遍说明书

[ 发自小木虫客户端 ]
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我要让你的生活因为有我而更精彩
2楼2015-01-03 23:28:39
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布丁小晓

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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胶回收后，点样时点几ul？多点几ul试试。有没有测胶回收后的浓度？
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4楼2015-01-04 17:28:32
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1009238055

金虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 2015-01-07 22:47:26
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:47:39
胶回收效率一般都不会很高的，更何况这么小的片段还来了两遍。建议楼主下次酶切后用PCR产物回收试剂盒，效率很高的。或者胶回收后电泳上样量弄大点，片段太小结合的核酸染料就比较少，看不到很正常。
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5楼2015-01-04 21:32:02
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
3楼: Originally posted by yzj926521 at 2015-01-04 08:56:49
回收2000bp和100bp中间步骤是有差别的，用于回收大片段的试剂盒回收小片段时需要有异丙醇处理一步的，或者你用专门用于小片段回收的盒子来做

楼上正解，片段太小，不能和常规的一样做
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
6楼2015-01-05 08:35:28
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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2000bp是100bp亮度20倍，你觉得能分辨出来吗
我也认为你收到了，对于回收的直接pcr估计就能看到了
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7楼2015-01-06 08:20:59
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:48:02
100bp太小，一般的回收试剂盒回收效率那是相当的差，仔细看看试剂盒的试剂回收片段范围。应该是试剂盒的问题。
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一品黄山
8楼2015-01-06 09:25:56
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781055707

木虫 (著名写手)
你可以按试剂盒上的方法加异丙醇。试试，效果好的话，和大家分享一下。
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采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2015-01-06 10:02:25
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李小同

木虫 (小有名气)

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小片段十有八九是从柱子上漏下去了
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10楼2015-01-06 11:31:07
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