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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 切胶回收100bp的片段，回收后跑电泳没有条带
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spirit_free

金虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by yzj926521 at 2015-01-04 08:56:49
回收2000bp和100bp中间步骤是有差别的，用于回收大片段的试剂盒回收小片段时需要有异丙醇处理一步的，或者你用专门用于小片段回收的盒子来做

加了异丙醇的，盒子是可以最小回收50bp片段的，目前觉得是2次回收，回收效率太低T T
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11楼2015-01-07 10:15:19
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spirit_free

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 布丁小晓 at 2015-01-04 17:28:32
胶回收后，点样时点几ul？多点几ul试试。有没有测胶回收后的浓度？

点了5ul 没有测浓度
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12楼2015-01-07 10:16:24
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spirit_free

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by ccandcc at 2015-01-06 08:20:59
2000bp是100bp亮度20倍，你觉得能分辨出来吗
我也认为你收到了，对于回收的直接pcr估计就能看到了

可能是收到了，但是浓度太低，没办法进行后续实验T T
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13楼2015-01-07 10:18:41
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spirit_free

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-06 10:02:25
你可以按试剂盒上的方法加异丙醇。试试，效果好的话，和大家分享一下。

是加了异丙醇的，效果也不是很好，小片段还是二次回收，回收效率低。
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14楼2015-01-07 10:21:36
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by spirit_free at 2015-01-07 10:21:36
是加了异丙醇的，效果也不是很好，小片段还是二次回收，回收效率低。...

哦，希望楼主连上呀。
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采菊东篱下，悠然见南山。
15楼2015-01-07 13:28:45
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倩倩的千千结

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是你回收胶的范围不够小，酶切后片段更小了，导致柱子上无法挂载
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16楼2015-01-07 13:47:32
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0616102018

木虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:48:36
告诉你个简单方法，切胶后按试剂盒说明加入溶胶液，溶解。然后，根据体积加入体积80％的异丙醇沉淀半个小时，离心，加入75％的乙醇洗，晾干。加水溶解即可。试剂盒的柱子都只能回收一定大小范围的片段，小片段回收的话对试剂盒的柱子要求比较高。或者你用进口试剂盒也可以回收得到。祝你好运。。。。
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有勇气就会有奇迹！
17楼2015-01-07 15:06:49
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spirit_free

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 0616102018 at 2015-01-07 15:06:49
告诉你个简单方法，切胶后按试剂盒说明加入溶胶液，溶解。然后，根据体积加入体积80％的异丙醇沉淀半个小时，离心，加入75％的乙醇洗，晾干。加水溶解即可。试剂盒的柱子都只能回收一定大小范围的片段，小片段回收的 ...

谢谢！学习了，去试试~
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18楼2015-01-07 22:56:34
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implicitly

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by spirit_free at 2015-01-07 22:56:34
谢谢！学习了，去试试~...

结果如何
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19楼2015-01-11 19:46:05
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cong1921

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by spirit_free at 2015-01-07 22:56:34
谢谢！学习了，去试试~...

能不能给个详细些的步骤啊，我刚刚做实验，也遇到这样的问题
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20楼2015-04-20 21:37:01
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