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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 组织特异性半定量RT-PCR，actin如何选择，引物如何设计，跪求高手……
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花随人愿

银虫 (小有名气)

[求助] 组织特异性半定量RT-PCR，actin如何选择，引物如何设计，跪求高手…… 已有1人参与

设计定量引物，像actin，他是一个大家族，有很多成员，每个成员按理说也是有特意性，在不同组织表达量有差异，所以我是针对特定的成员设计特异性引物还是在所有成员的保守区设计引物？
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1楼 2015-05-23 10:24:14
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晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 花随人愿 at 2015-05-23 20:24:50
是检测单个基因，要选个内参，不知道选一个actin还把所有拷贝的actin当做一个actin来处理。...

选择一个actin就可以了，用你所用物种的actin引物做内参，可参考相关文献的引物序列，合成回来检测一下特异性。
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4楼2015-05-23 20:26:22
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
花随人愿: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢你的帮助！ 2015-05-27 22:01:34
你要是检测单个基因的表达量，必须要避开保守区域设计探针，否则扩增出来的就不是单一基因的表达量了。
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2楼2015-05-23 14:36:21
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花随人愿

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-23 14:36:21
你要是检测单个基因的表达量，必须要避开保守区域设计探针，否则扩增出来的就不是单一基因的表达量了。

是检测单个基因，要选个内参，不知道选一个actin还把所有拷贝的actin当做一个actin来处理。
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3楼2015-05-23 20:24:50
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