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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒单酶切后，跑胶条带弥散，但是未酶切的跑胶正常，谢各位大侠
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龙猫龙猫龙猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒单酶切后，跑胶条带弥散，但是未酶切的跑胶正常，谢各位大侠 已有4人参与

如题，用TAKARA的ECORI做质粒单酶切，20微升体系，37℃ 1小时。但是跑胶之后就是弥散的条带。另一个孔的原质粒正常。
为了排除，还做了只加BUFFFER的，但是也弥散了。
MARKER正常。
反复了十几次，都这样，谁能告诉我这是为什么呢。。。。。。。。
谢谢大家！
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1楼 2015-04-28 15:40:26
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个酶试一试，排除你的酶切体系没问题。
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2楼2015-04-28 16:47:24
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龙猫龙猫龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-04-28 16:47:24
换个酶试一试，排除你的酶切体系没问题。

你好，我分别买了两家公司的酶，NEB和TAKARA的，但是出了一样的问题。我的质粒是用质粒提取试剂盒回收的。在多次失败之后，又进行了一次提取，但是还是一样的问题。
真的不知道怎么回事了。、、、、
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3楼2015-04-28 16:58:56
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lhl0538

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
龙猫龙猫龙猫(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:51:34
将酶切时间延长或者减少质粒的量减少
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4楼2015-04-28 18:37:24
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qhn0725

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降解了？换buffer，换酶试一下
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5楼2015-04-28 19:50:12
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把弥散产物酚氯仿抽提或者过一下吸附柱再电泳

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2015-04-28 22:40:28
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