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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA测序，公司结果是条带非特异是什么意思啊？
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9955

新虫 (小有名气)

[求助] DNA测序，公司结果是条带非特异是什么意思啊？已有5人参与

测的一个真菌的DNA，提DNA---PCR---电泳，
电泳出来也有条带
然后送公司测序，测倒是测出来了也有序列，它发给我的文件夹标题是---非特异性条带
是说我哪一步做错了吗？
头回做，啥也不懂
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1楼2015-04-27 09:33:34
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9955

新虫 (小有名气)
有没有人啊啊啊
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2楼2015-04-27 09:42:36
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9955

新虫 (小有名气)
3楼2015-04-27 09:51:37
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li245824369

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
9955: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-27 11:07:21
你是连接到载体测序么，还是产物直接测序，如果产物直接测序应该胶回收纯化再送去结果会准的！
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4楼2015-04-27 10:08:13
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9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by li245824369 at 2015-04-27 10:08:13
你是连接到载体测序么，还是产物直接测序，如果产物直接测序应该胶回收纯化再送去结果会准的！

是产物直接测序的
DNA  家了引物直接PCR,我看别人说出现非特异条带都说除了本来的一条再有的是非特异性条带，
我PCR完了电泳就一个条带，那说明这个条带就是非特异性的吗？
是我做PCR没做好吗？
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5楼2015-04-27 11:06:59
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9955

新虫 (小有名气)
还有，条带非特异是什么意思？是说条带在别的生物上也有吗
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6楼2015-04-27 11:12:49
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9955

新虫 (小有名气)
。。。。。。。。。。。。。
7楼2015-04-27 11:17:14
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
9955: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-04-27 19:38:31
非特异的意思就是里面不止一种产物。一般来说还是克隆测序结果可靠。你用PCR产物测序的话，要求引物纯度非常高，比如你合成的是20个碱基的，如果里面有少量的19bp的引物（3‘端少一个碱基）的话，测序出来的结果也是非特异的，但是对PCR扩增是没有影响的，PCR产物电泳结果也是一条带。
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8楼2015-04-27 12:43:06
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
9955: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-04-27 19:46:50
所谓的非特异性条带就是你的引物特异性不好或者PCR反应条件的问题，导致PCR结果除了你的目的条带意外，还会有其他杂带的出现，那些杂带就是非特异性条带。而且不像你说的有非特异性条带才算好，条带越是单一说明PCR越是成功，所以你做的很好，至于你有没有出错，你拿公司测序结果和原有的序列比对一下不就知道了吗！ 祝楼主顺利！
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我要让你的生活因为有我而更精彩
9楼2015-04-27 14:33:47
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 09:42:36
有没有人啊啊啊

看了下直接测序是要自己做个切胶回收，另外非特异性扩增说明你引物特异性不是很好，建议重设几对引物。
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10楼2015-04-27 14:40:01
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