应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA测序，公司结果是条带非特异是什么意思啊？
172/2返回列表上一页12
查看: 2162  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-27 12:43:06
非特异的意思就是里面不止一种产物。一般来说还是克隆测序结果可靠。你用PCR产物测序的话，要求引物纯度非常高，比如你合成的是20个碱基的，如果里面有少量的19bp的引物（3‘端少一个碱基）的话，测序出来的结果也是 ...

谢谢
我PCR做了4管，只有一管有条带，而且就一条o(╯□╰)o
当时我还觉得做的挺好，就送去测序了

我用的引物是ITS1和ITS4，是真菌很普遍很适用的引物
是不是我操作出了问题引起污染了吗？
赞一下 回复此楼
11楼2015-04-27 19:42:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-27 14:33:47
所谓的非特异性条带就是你的引物特异性不好或者PCR反应条件的问题，导致PCR结果除了你的目的条带意外，还会有其他杂带的出现，那些杂带就是非特异性条带。而且不像你说的有非特异性条带才算好，条带越是单一说明PCR ...

可不知道原来的序列啊？如果知道的话就不用测序了。。。。。。。。
只有一条还非特异性的，那是不是说明从一开始提DNA就没做好呢。。。
哎。。。
不知道哪一步出错了？
赞一下 回复此楼
12楼2015-04-27 19:48:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingheqian

金虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 19:42:39
谢谢
我PCR做了4管，只有一管有条带，而且就一条o(╯□╰)o
当时我还觉得做的挺好，就送去测序了

我用的引物是ITS1和ITS4，是真菌很普遍很适用的引物
是不是我操作出了问题引起污染了吗？...

T-A克隆测序吧，结果可靠
赞一下 回复此楼
13楼2015-04-27 20:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-27 20:28:43
T-A克隆测序吧，结果可靠...

哥们，对初学者咱别用略称好吗？
T-A是啥啊，我还得百度啊
赞一下 回复此楼
14楼2015-04-27 20:36:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 19:48:55
可不知道原来的序列啊？如果知道的话就不用测序了。。。。。。。。
只有一条还非特异性的，那是不是说明从一开始提DNA就没做好呢。。。
哎。。。
不知道哪一步出错了？...

近亲比对也是可以的 应该不是模板的事，你可以搞个管家基因跑一下，验证一下模板DNA是否有问题。重新设计引物吧，或者换成高保真的酶试一下
赞一下 回复此楼
我要让你的生活因为有我而更精彩
15楼2015-04-28 11:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

li245824369

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 11:06:59
是产物直接测序的
DNA  家了引物直接PCR,我看别人说出现非特异条带都说除了本来的一条再有的是非特异性条带，
我PCR完了电泳就一个条带，那说明这个条带就是非特异性的吗？
是我做PCR没做好吗？...

那你要看长度是不是你预期的长度，如果是连接载体测序应该没有问题。
赞一下 回复此楼
16楼2015-04-28 14:35:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

527219179

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PCR产物中可能有多种核苷酸链，链的长度可能相同，所以直接测PCR产物都是不准确的。TA克隆，将产物与克隆载体连接，转入大肠杆菌，提取质粒、测序，可以得到单一目的条带（因为每个质粒只能结合一条DNA链）。
赞一下 回复此楼
17楼2015-05-04 12:16:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 9955 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 6/300 2026-08-25 00:11 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭