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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA测序，公司结果是条带非特异是什么意思啊？
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9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-27 12:43:06
非特异的意思就是里面不止一种产物。一般来说还是克隆测序结果可靠。你用PCR产物测序的话，要求引物纯度非常高，比如你合成的是20个碱基的，如果里面有少量的19bp的引物（3‘端少一个碱基）的话，测序出来的结果也是 ...

谢谢
我PCR做了4管，只有一管有条带，而且就一条o(╯□╰)o
当时我还觉得做的挺好，就送去测序了

我用的引物是ITS1和ITS4，是真菌很普遍很适用的引物
是不是我操作出了问题引起污染了吗？
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11楼2015-04-27 19:42:39
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9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-27 14:33:47
所谓的非特异性条带就是你的引物特异性不好或者PCR反应条件的问题，导致PCR结果除了你的目的条带意外，还会有其他杂带的出现，那些杂带就是非特异性条带。而且不像你说的有非特异性条带才算好，条带越是单一说明PCR ...

可不知道原来的序列啊？如果知道的话就不用测序了。。。。。。。。
只有一条还非特异性的，那是不是说明从一开始提DNA就没做好呢。。。
哎。。。
不知道哪一步出错了？
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12楼2015-04-27 19:48:55
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yingheqian

金虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 19:42:39
谢谢
我PCR做了4管，只有一管有条带，而且就一条o(╯□╰)o
当时我还觉得做的挺好，就送去测序了

我用的引物是ITS1和ITS4，是真菌很普遍很适用的引物
是不是我操作出了问题引起污染了吗？...

T-A克隆测序吧，结果可靠
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13楼2015-04-27 20:28:43
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9955

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-27 20:28:43
T-A克隆测序吧，结果可靠...

哥们，对初学者咱别用略称好吗？
T-A是啥啊，我还得百度啊
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14楼2015-04-27 20:36:52
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 19:48:55
可不知道原来的序列啊？如果知道的话就不用测序了。。。。。。。。
只有一条还非特异性的，那是不是说明从一开始提DNA就没做好呢。。。
哎。。。
不知道哪一步出错了？...

近亲比对也是可以的 应该不是模板的事，你可以搞个管家基因跑一下，验证一下模板DNA是否有问题。重新设计引物吧，或者换成高保真的酶试一下
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我要让你的生活因为有我而更精彩
15楼2015-04-28 11:11:11
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li245824369

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 9955 at 2015-04-27 11:06:59
是产物直接测序的
DNA  家了引物直接PCR,我看别人说出现非特异条带都说除了本来的一条再有的是非特异性条带，
我PCR完了电泳就一个条带，那说明这个条带就是非特异性的吗？
是我做PCR没做好吗？...

那你要看长度是不是你预期的长度，如果是连接载体测序应该没有问题。
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16楼2015-04-28 14:35:46
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527219179

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PCR产物中可能有多种核苷酸链，链的长度可能相同，所以直接测PCR产物都是不准确的。TA克隆，将产物与克隆载体连接，转入大肠杆菌，提取质粒、测序，可以得到单一目的条带（因为每个质粒只能结合一条DNA链）。
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17楼2015-05-04 12:16:25
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