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9955

新虫 (小有名气)

[求助] DNA测序,公司结果是条带非特异是什么意思啊?已有5人参与

测的一个真菌的DNA,提DNA---PCR---电泳,
电泳出来也有条带
然后送公司测序,测倒是测出来了也有序列,它发给我的文件夹标题是---非特异性条带
是说我哪一步做错了吗?
头回做,啥也不懂
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9955

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-27 12:43:06
非特异的意思就是里面不止一种产物。一般来说还是克隆测序结果可靠。你用PCR产物测序的话,要求引物纯度非常高,比如你合成的是20个碱基的,如果里面有少量的19bp的引物(3‘端少一个碱基)的话,测序出来的结果也是 ...

谢谢
我PCR做了4管,只有一管有条带,而且就一条o(╯□╰)o
当时我还觉得做的挺好,就送去测序了

我用的引物是ITS1和ITS4,是真菌很普遍很适用的引物
是不是我操作出了问题引起污染了吗?
11楼2015-04-27 19:42:39
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9955

新虫 (小有名气)

3楼2015-04-27 09:51:37
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li245824369

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
9955: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-27 11:07:21
你是连接到载体测序么,还是产物直接测序,如果产物直接测序应该胶回收纯化再送去结果会准的!
4楼2015-04-27 10:08:13
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9955

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by li245824369 at 2015-04-27 10:08:13
你是连接到载体测序么,还是产物直接测序,如果产物直接测序应该胶回收纯化再送去结果会准的!

是产物直接测序的
DNA  家了引物直接PCR,我看别人说出现非特异条带都说除了本来的一条再有的是非特异性条带,
我PCR完了电泳就一个条带,那说明这个条带就是非特异性的吗?
是我做PCR没做好吗?
5楼2015-04-27 11:06:59
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