24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 678.8
帖子: 84
在线: 72.5小时
虫号: 2880779
注册: 2013-12-18
专业: 细胞信号转导

[求助] PCR之后跑胶有条带，测序测不出来已有8人参与

PCR之后跑胶有条带，且条带单一，但是送到公司测序一直测不出来？说是信号弱，测序失败，这是怎么回事？接下来怎么做？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

PCR产物跑胶出来大小是750BP左右，然后送去测序只有300多BP这是为啥已经有10人回复
PCR后跑胶为什么会出现这样的情况？已经有6人回复
菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果已经有6人回复
求指导！要测序，长度为1500左右，是pcr产物直接测序好还是连接转化测序比较好？已经有9人回复
复杂模板，pcr，求指导？？？已经有18人回复
PCR后跑胶，两种颜色分别是啥？已经有5人回复
ＰＣＲ产物跑电泳，随着跑电泳时间的增加，，条带会下移，最后竟然消失了，怎么回事呀已经有25人回复
电泳的时候，总DNA跑出条带，PCR扩增后没有条带，都有什么原因啊已经有8人回复
PCR产物跑胶有明显的条带，但是测序测不出来，求会看峰图的指导一下是哪里出现的问题已经有4人回复
PCR后跑胶没有任何条带已经有49人回复
跑PCR，琼脂糖电泳没有条带出现已经有14人回复
急！各位帮忙看看，PCR后跑的琼脂糖凝胶电泳图，条带不清晰原因是什么？已经有16人回复
PCR结果为目的条带，可是测序同源比对很差，这是为什么呀？求助！！！已经有6人回复
sanger测序原理和PCR关系已经有3人回复
PCR产物鉴定时有目的条带，跑回收胶时却没有目的条带，这是为什么？已经有15人回复
试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。已经有10人回复
菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？已经有6人回复
急急急！巢式PCR，第二轮产物跑胶点样孔有亮带，似有东西跑不出已经有7人回复
菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？已经有16人回复
胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。已经有16人回复
PCR产物跑胶跑不动，什么原因？已经有10人回复
求助PCR老是跑不出条带已经有16人回复
DEEG条带测序问题已经有7人回复
【求助/交流】PCR产物直接测序，不出峰，啥原因？已经有11人回复

1楼 2015-04-19 23:07:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

王冠傑

铁虫 (小有名气)

应助: 11 (小学生)
金币: 800.6
帖子: 62
在线: 19小时
虫号: 2417175
注册: 2013-04-14
性别: GG
专业: 免疫遗传学

【答案】应助回帖

★
NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:06:39

测序PCR对样本和引物的要求都比较高，送样前应该先自己测一下浓度100ng每ul是足够了，其次引物的特异性，引物中是否存在简并碱基？这会影响样本与引物的结合度。引物TM值是多少，一般要控制在50左右，引物长度控制在17～24.以上都确保OK的话一般来说没有问题，实在不行连T载，T载拷贝数高，通用引物特异性好，不会测不出来的，除非刚开始就遇到高级结构测序中断。