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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » PCR之后跑胶有条带，测序测不出来
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

[求助] PCR之后跑胶有条带，测序测不出来 已有8人参与

PCR之后跑胶有条带，且条带单一，但是送到公司测序一直测不出来？说是信号弱，测序失败，这是怎么回事？接下来怎么做？
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1楼 2015-04-19 23:07:03
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液太稀了呗！所以测不出来！你可以提质粒看看，再送

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2楼2015-04-20 00:33:56
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:06:09
信号弱，可能是引物和模板结合不好，经常遇到这种情况，用的什么引物测的。实在不行，换个公司

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天道酬勤
3楼2015-04-20 08:28:27
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qaz139687

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引物和模板结合问题，可以提高循环数在试下
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4楼2015-04-20 10:00:21
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nemo88

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2015-04-22 09:08:21
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yzheng29

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:06:32
如果用的通用引物测序的话，可能引物和模板结合效果不太好，可以自己设计测序引物，一起送测序

也要考虑你的模板浓度是否达到要求
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6楼2015-04-22 17:51:10
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:06:39
测序PCR对样本和引物的要求都比较高，送样前应该先自己测一下浓度100ng每ul是足够了，其次引物的特异性，引物中是否存在简并碱基？这会影响样本与引物的结合度。引物TM值是多少，一般要控制在50左右，引物长度控制在17～24.以上都确保OK的话一般来说没有问题，实在不行连T载，T载拷贝数高，通用引物特异性好，不会测不出来的，除非刚开始就遇到高级结构测序中断。
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7楼2015-05-10 16:38:53
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:06:50
我也遇见过这种情况，是送去华大测的序没有测出。
但幸亏当时P了两管，第二管送去生工测序测出了，可能是公司的原因，当然也有可能是你P的浓度不够，还要注意这些测序公司要求送样的量，华大低于30ul基本是给你测不出来的（虽然他们公司来取样的保证说能测出来。。）
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天生自弃难丽质
8楼2015-05-10 19:45:35
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人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我也遇到过这种情况 开始送的一家公司 测序失败 后来我换了一个公司 而且我是又培养了一夜之后送去的 不知道跟这个有没有关系 你可以试着换个公司
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9楼2015-05-11 16:10:44
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