应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：PCR第一次做有条带 之后想做胶回收但是再没有P出条带 求指教 拜托！
51/1返回列表
查看: 971  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rendan911117

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：PCR第一次做有条带 之后想做胶回收但是再没有P出条带 求指教 拜托！ 已有2人参与

我做的酵母基因组的克隆，第一次PCR用的是Takara的酶，有条带。隔了一个假期之后，实验室的酶被换成了生工的，就没有P出条带。后来反复尝试之后终于有了条带，但是想做胶回收的时候，就再也没有P出条带。有时候P相同的6管，会有一管有条带，其他五管没有，但多数都是6管都没有条带。

请问有没有人遇到过这种情况，或者是有没有人知道会是什么可能，给提一些建议。拜托各位！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-16 19:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aixiachun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议：
1、如果你用一种酶能扩出来，那就再买那种酶扩。
2、如果你其中一管扩出了，而且是正确的，你可以用这管的产物作为模板再扩增，这样排除原来模板的不确定因素，而且扩出的条带很单一。
PCR的失败原因很难找，祝你好运！
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-16 20:53:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为和哪家公司的酶关系不大，主要是同一种酶就OK了，我觉得你第一次估计用的taq酶，然后换成生工的pfu酶了，因为pfu保真性比较高，所以可能没P出条带，而Taq酶保真性不好，所以你才P出条带，如果真是这种情况的话，因为你有跑出条带，所以应该不是模板的问题，所以你可以设置退火温度梯度来确定最佳退火温度或者重新设计引物。祝好！！
赞一下 回复此楼
我要让你的生活因为有我而更精彩
3楼2015-04-16 21:54:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aixiachun at 2015-04-16 20:53:00
建议：
1、如果你用一种酶能扩出来，那就再买那种酶扩。
2、如果你其中一管扩出了，而且是正确的，你可以用这管的产物作为模板再扩增，这样排除原来模板的不确定因素，而且扩出的条带很单一。
PCR的失败原因很难 ...

好  非常感谢
回复此楼
4楼2015-04-21 21:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-16 21:54:21
个人认为和哪家公司的酶关系不大，主要是同一种酶就OK了，我觉得你第一次估计用的taq酶，然后换成生工的pfu酶了，因为pfu保真性比较高，所以可能没P出条带，而Taq酶保真性不好，所以你才P出条带，如果真是这种情况的 ...

好的 那我设一个温度梯度试试  非常感谢
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-21 21:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rendan911117 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 21:14 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-16 21:03 by MHf40yA0Uhyb
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:15 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 16:51 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 16:24 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 16:12 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-16 14:36 by i3KBRD19ERkG
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-16 03:26 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-16 03:23 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:23 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭