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想要做的更好

1楼2015-01-22 16:17:17

晞朔

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-23 13:47:00

目的条带大小正确，可以回收，纯化后测序，或者直接做TA克隆，测序。

2楼2015-01-22 16:49:20

xiangqin90

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2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-22 16:49:20
目的条带大小正确，可以回收，纯化后测序，或者直接做TA克隆，测序。

现在不清楚目的条带大小，但是是用保真性高的那个条带（前面的图）切胶回收还是后面低的回收呢？

想要做的更好

3楼2015-01-22 18:13:48

晞朔

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引用回帖:

3楼: Originally posted by xiangqin90 at 2015-01-22 18:13:48
现在不清楚目的条带大小，但是是用保真性高的那个条带（前面的图）切胶回收还是后面低的回收呢？...

那你只能两条都切了，回收PCR测序再去比对吧。或许你会有新的发现。

4楼2015-01-22 18:23:17

xiangqin90

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4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-22 18:23:17
那你只能两条都切了，回收PCR测序再去比对吧。或许你会有新的发现。...

切哪个酶P的呢？

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5楼2015-01-22 18:32:32

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-23 13:47:06

请问你的模板是多少bp（kb）的呢，不超过10kb不建议使用LA ,对扩增可能会起到反作用。直接做TA克隆的，建议还是第一张图easy Taq扩增的那个。如果想保证扩增的特异性或不拖尾，小于10kb的建议使用热启动聚合酶即可，高保真酶也是，可能会将你的模板降解掉，如果对下游应用没有精确要求（如测序类似的），也不建议使用高保真酶。

todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful

6楼2015-01-23 10:09:55