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xiangqin90

新虫 (初入文坛)

[求助] 用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带，能切胶回收做TA克隆吗？ 已有2人参与

用EasyTaq酶PCR后条带较为清晰，但用LATaq酶P却出现严重的拖尾，这是怎么回事？优化几次PCR条件之后，还是有这样的拖带，我能切胶回收做TA克隆吗？

用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带，能切胶回收做TA克隆吗？
2015.1.22.jpg


用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带，能切胶回收做TA克隆吗？-1
2015.1.20.jpg
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想要做的更好
1楼 2015-01-22 16:17:17
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-23 13:47:00
目的条带大小正确，可以回收，纯化后测序，或者直接做TA克隆，测序。
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2楼2015-01-22 16:49:20
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-22 16:49:20
目的条带大小正确，可以回收，纯化后测序，或者直接做TA克隆，测序。

现在不清楚目的条带大小，但是是用保真性高的那个条带（前面的图）切胶回收还是后面低的回收呢？
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想要做的更好
3楼2015-01-22 18:13:48
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晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiangqin90 at 2015-01-22 18:13:48
现在不清楚目的条带大小，但是是用保真性高的那个条带（前面的图）切胶回收还是后面低的回收呢？...

那你只能两条都切了，回收PCR测序再去比对吧。或许你会有新的发现。
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4楼2015-01-22 18:23:17
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-22 18:23:17
那你只能两条都切了，回收PCR测序再去比对吧。或许你会有新的发现。...

切哪个酶P的呢？
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想要做的更好
5楼2015-01-22 18:32:32
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-23 13:47:06
请问你的模板是多少bp（kb）的呢，不超过10kb不建议使用LA ,对扩增可能会起到反作用。直接做TA克隆的，建议还是第一张图easy Taq扩增的那个。如果想保证扩增的特异性或不拖尾，小于10kb的建议使用热启动聚合酶即可，高保真酶也是，可能会将你的模板降解掉，如果对下游应用没有精确要求（如测序类似的），也不建议使用高保真酶。
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-01-23 10:09:55
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