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xiangqin90

新虫 (初入文坛)

[求助] 用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带,能切胶回收做TA克隆吗?已有2人参与

用EasyTaq酶PCR后条带较为清晰,但用LATaq酶P却出现严重的拖尾,这是怎么回事?优化几次PCR条件之后,还是有这样的拖带,我能切胶回收做TA克隆吗?

用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带,能切胶回收做TA克隆吗?
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用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带,能切胶回收做TA克隆吗?-1
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-23 13:47:06
请问你的模板是多少bp(kb)的呢,不超过10kb不建议使用LA ,对扩增可能会起到反作用。直接做TA克隆的,建议还是第一张图easy Taq扩增的那个。如果想保证扩增的特异性或不拖尾,小于10kb的建议使用热启动聚合酶即可,高保真酶也是,可能会将你的模板降解掉,如果对下游应用没有精确要求(如测序类似的),也不建议使用高保真酶。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-01-23 10:09:55
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