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xiangqin90

新虫 (初入文坛)

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[求助] 用LATaq酶PCR的产物电泳条带拖带，能切胶回收做TA克隆吗？已有2人参与

用EasyTaq酶PCR后条带较为清晰，但用LATaq酶P却出现严重的拖尾，这是怎么回事？优化几次PCR条件之后，还是有这样的拖带，我能切胶回收做TA克隆吗？

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想要做的更好

1楼 2015-01-22 16:17:17

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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-23 13:47:06

请问你的模板是多少bp（kb）的呢，不超过10kb不建议使用LA ,对扩增可能会起到反作用。直接做TA克隆的，建议还是第一张图easy Taq扩增的那个。如果想保证扩增的特异性或不拖尾，小于10kb的建议使用热启动聚合酶即可，高保真酶也是，可能会将你的模板降解掉，如果对下游应用没有精确要求（如测序类似的），也不建议使用高保真酶。