2楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-07-24 18:09:20
确定延伸时间足够？

4楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-24 19:54:55
你的模板有测过浓度么？是否测序过？上次p出来的条带暗的话，很有可能模板本身就有问题。你同学的条带也并不一定可信。

5楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-24 20:21:03
关键是只有他的东西了为模板了，我给别人做呢，没测过浓度，也没测序过。...

6楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-24 20:51:14
没测过浓度也没测序，就拿来做模板么。。。
实在不行，就换用好的聚合酶吧。

还有一个方法，是连接到亚克隆载体上，然后转化感受态提质粒再用来做模板，不过要是你的模板不够的话就不好说了。

没有其 ...

7楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-24 22:03:56
嗯，我之前也想过连T载体，但是有条杂带比目的条带亮，感觉行不通。这个模板好像是他们做重叠pcr得到的，所以要没有的话只能重新再来，很郁闷的说，关键这不是我的东西，这么不顺利感觉压力好大呀。...

8楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-25 02:09:16
他们自己做完居然不测浓度也不测序，相当不靠谱诶。。。

要是模板量还有些的话就试试连载体吧，然后做菌液PCR找你要的条带，阳性菌落的比例估计会比较低但也不是不可行。

还有就是你用的是什么聚合酶？最好用 ...

9楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-25 09:35:08
我突然想到这个模板是不是要稀释呀？因为我一直觉得模板浓度不高所以也没稀释，但是看他们之前P出的条带不是现在的模板，但是据他们说那个模板几乎看不到目的条带，而我昨天看了下现在的模板，条带虽然不亮但还是很 ...