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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] PCR有时能出来带有时出不来已有8人参与

最近做一个PCR，很难做，要么能出来条带，很暗，要么完全看不到条带，试了各种体系，模板是上次同学P出来的，因为条带也暗，没有稀释过，反正出不来。偶尔一次用出来的条带再p，完全没有。想哭啊，现在模板都快用完了，怎么办呀。
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1楼2014-07-24 17:50:57
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-24 22:42:19
引用回帖:
5楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-24 20:21:03
关键是只有他的东西了为模板了，我给别人做呢，没测过浓度，也没测序过。...

没测过浓度也没测序，就拿来做模板么。。。
实在不行，就换用好的聚合酶吧。

还有一个方法，是连接到亚克隆载体上，然后转化感受态提质粒再用来做模板，不过要是你的模板不够的话就不好说了。

没有其他的模板么？只要是有表达的基因，总可以用cDNA来做模板的吧。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
6楼2014-07-24 20:51:14
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古木宁天

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-24 21:24:11
确定延伸时间足够？
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懒
2楼2014-07-24 18:09:20
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-07-24 18:09:20
确定延伸时间足够？

嗯是的，而且普通PCR出不来，我用的是TD
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-24 18:21:10
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 11:14:37
你的模板有测过浓度么？是否测序过？上次p出来的条带暗的话，很有可能模板本身就有问题。你同学的条带也并不一定可信。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
4楼2014-07-24 19:54:55
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