应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR有时能出来带有时出不来
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
51/1返回列表
查看: 2272  |  回复: 24
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] PCR有时能出来带有时出不来已有8人参与

最近做一个PCR，很难做，要么能出来条带，很暗，要么完全看不到条带，试了各种体系，模板是上次同学P出来的，因为条带也暗，没有稀释过，反正出不来。偶尔一次用出来的条带再p，完全没有。想哭啊，现在模板都快用完了，怎么办呀。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

重组的景区

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-07-24 17:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-25 02:09:16
他们自己做完居然不测浓度也不测序，相当不靠谱诶。。。

要是模板量还有些的话就试试连载体吧，然后做菌液PCR找你要的条带，阳性菌落的比例估计会比较低但也不是不可行。

还有就是你用的是什么聚合酶？最好用 ...

我突然想到这个模板是不是要稀释呀？因为我一直觉得模板浓度不高所以也没稀释，但是看他们之前P出的条带不是现在的模板，但是据他们说那个模板几乎看不到目的条带，而我昨天看了下现在的模板，条带虽然不亮但还是很清晰的，会不会是问题在这儿？

至于连载体我还是觉得不行，主要下面那条杂带比目的条带多，我得阳性菌落很难找到

我用的是TAq和pfu，你说的GC含量这块儿是没注意过，从来没遇到这样的问题。

总之很感谢，你分析的方法很有用啊，谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-25 09:35:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

古木宁天

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-24 21:24:11
确定延伸时间足够？
赞一下 回复此楼
懒
2楼2014-07-24 18:09:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-07-24 18:09:20
确定延伸时间足够？

嗯是的，而且普通PCR出不来，我用的是TD
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-24 18:21:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 11:14:37
你的模板有测过浓度么？是否测序过？上次p出来的条带暗的话，很有可能模板本身就有问题。你同学的条带也并不一定可信。
赞一下 回复此楼
下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
4楼2014-07-24 19:54:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭