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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR有时能出来带有时出不来
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-25 09:53:20
哈哈，应该的嘛。我昨天也一直忘了说，就算他们没测浓度你自己还是可以拿去nanodrop上测一下的嘛。不过你说条带暗的话应该浓度不会太高，一般100-200ng就可以看到清晰的条带的，这个量用来做模版足够了。你跑胶看模 ...

主要我感觉我们这边测浓度的不准，一下很低，一下飙到很高，只能自己大概估一下，而且，要测的话岂不是杂带的量也算上了？还是得自己估算。我觉得我的估计也就十几ng太暗了。我再看看吧，等解决了告诉你哈，有可能我得重头开始做，呵呵，也希望你一切顺利。
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11楼2014-07-25 10:03:32
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 11:14:55
建议把模板回收一下（不要切胶回收，直接回收，切胶你也回收不到）然后PCR,退火温度降低，循环数多一点
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12楼2014-07-25 14:28:26
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-25 14:28:26
建议把模板回收一下（不要切胶回收，直接回收，切胶你也回收不到）然后PCR,退火温度降低，循环数多一点

这个也做过，还是不行
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13楼2014-07-25 15:42:19
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-25 15:42:19
这个也做过，还是不行...

那就是确定模板有问题
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14楼2014-07-25 20:29:35
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panhp2004

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 11:15:07
PCR 时加 10% DMSO，50 ul 体系的话加 25 ul，可能有用。
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追梦是一个快乐的过程。
15楼2014-07-25 21:41:06
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-25 20:29:35
那就是确定模板有问题...

嗯，模板不好
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16楼2014-07-25 21:47:14
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by panhp2004 at 2014-07-25 21:41:06
PCR 时加 10% DMSO，50 ul 体系的话加 25 ul，可能有用。

额，这个是什么作用呢？
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17楼2014-07-25 21:47:41
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圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用温度梯度试一试啦，也许对你有帮助
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18楼2014-07-25 22:42:38
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 圆yy at 2014-07-25 22:42:38
用温度梯度试一试啦，也许对你有帮助

嗯，谢谢，不过试过了还是不行。
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19楼2014-07-27 10:06:56
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
泡菜肉丝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 12:04:52
个人的经验是要把PCR的产物稀释一下，再以其为模版进行。
一般我是稀释30倍。
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20楼2014-07-28 10:28:20
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