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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：PCR第一次做有条带 之后想做胶回收但是再没有P出条带 求指教 拜托！
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rendan911117

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：PCR第一次做有条带 之后想做胶回收但是再没有P出条带 求指教 拜托！已有2人参与

我做的酵母基因组的克隆，第一次PCR用的是Takara的酶，有条带。隔了一个假期之后，实验室的酶被换成了生工的，就没有P出条带。后来反复尝试之后终于有了条带，但是想做胶回收的时候，就再也没有P出条带。有时候P相同的6管，会有一管有条带，其他五管没有，但多数都是6管都没有条带。

请问有没有人遇到过这种情况，或者是有没有人知道会是什么可能，给提一些建议。拜托各位！
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1楼2015-04-16 19:08:48
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为和哪家公司的酶关系不大，主要是同一种酶就OK了，我觉得你第一次估计用的taq酶，然后换成生工的pfu酶了，因为pfu保真性比较高，所以可能没P出条带，而Taq酶保真性不好，所以你才P出条带，如果真是这种情况的话，因为你有跑出条带，所以应该不是模板的问题，所以你可以设置退火温度梯度来确定最佳退火温度或者重新设计引物。祝好！！
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我要让你的生活因为有我而更精彩
3楼2015-04-16 21:54:21
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aixiachun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议：
1、如果你用一种酶能扩出来，那就再买那种酶扩。
2、如果你其中一管扩出了，而且是正确的，你可以用这管的产物作为模板再扩增，这样排除原来模板的不确定因素，而且扩出的条带很单一。
PCR的失败原因很难找，祝你好运！
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2楼2015-04-16 20:53:00
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aixiachun at 2015-04-16 20:53:00
建议：
1、如果你用一种酶能扩出来，那就再买那种酶扩。
2、如果你其中一管扩出了，而且是正确的，你可以用这管的产物作为模板再扩增，这样排除原来模板的不确定因素，而且扩出的条带很单一。
PCR的失败原因很难 ...

好  非常感谢
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4楼2015-04-21 21:19:44
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-16 21:54:21
个人认为和哪家公司的酶关系不大，主要是同一种酶就OK了，我觉得你第一次估计用的taq酶，然后换成生工的pfu酶了，因为pfu保真性比较高，所以可能没P出条带，而Taq酶保真性不好，所以你才P出条带，如果真是这种情况的 ...

好的 那我设一个温度梯度试试  非常感谢
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5楼2015-04-21 21:20:10
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