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山脚下的喵

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[求助] 反转录pcr,条带弥散

大侠好,我dsRNA加接头以后,放在-20℃,大概4天,后来又在室内放置了一夜,cDNA合成后,跑胶没有条带,pcr条带是上部弥散的,如下图
1 是不是因为在室内放置,所以降解了加接头后的产物呢?
2 cDNA合成后,跑胶没有条带,是否正常?
3 阴性对照也是弥散的,这说明是有污染么?
4 之前加接头时,DTT用的浓度比较大,这会是原因之一么?
5 pcr时用的是mix(dNTP,酶),而不是高保真的酶和GC Buffer,这会是原因么?
先谢谢各位大侠~~

反转录pcr,条带弥散
15.4.12,反转录PCR后,M_副本_副本_副本.jpg
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