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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。
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yqs129219

新虫 (小有名气)

[求助] 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。

做反转录CDNA的时候要求42度30分钟，85度5分钟，在pcr仪上进行的话要不要设置盖子的温度，105度盖子温度会不会高，这个只做反转录，没有进行扩增
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1楼 2012-08-02 20:58:20
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-03 13:55:45
你说的这个我们当时做的时候还真的没有注意，不过当时我们没有管盖子的温度，后面反转录CDNA没有影响，你做PCR的时候盖子的温度也很高，你的退火温度有的也是五六十度的吧……
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上班族，学习ing……
2楼2012-08-02 21:09:04
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yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-08-02 21:09:04
你说的这个我们当时做的时候还真的没有注意，不过当时我们没有管盖子的温度，后面反转录CDNA没有影响，你做PCR的时候盖子的温度也很高，你的退火温度有的也是五六十度的吧……

扩增的时候盖子的温度是要105度防止挥发，现在只在pcr仪上做个反转录，也不知道要不要设盖子温度
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3楼2012-08-02 21:17:27
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-02 21:17:27
扩增的时候盖子的温度是要105度防止挥发，现在只在pcr仪上做个反转录，也不知道要不要设盖子温度...

我们当时也是在PCR仪上做的反转，盖子温度没有管，还是原来PCR的温度，只是改了后面反转的温度和事件条件
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上班族，学习ing……
4楼2012-08-02 21:32:42
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yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-08-02 21:32:42
我们当时也是在PCR仪上做的反转，盖子温度没有管，还是原来PCR的温度，只是改了后面反转的温度和事件条件...

那就还是105度没有改了，做扩增的时候是要盖子温度要不会挥发了，扩增时间长一点
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5楼2012-08-02 21:35:40
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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只要热盖温度比管内溶液温度高就OK了，只要你的程序中没有超过70℃的温度循环，你甚至可以设置为70℃
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6楼2012-08-02 22:06:49
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yangtianyuan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
盖子的温度没有关系，它是一个热传导的过程的。
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7楼2012-08-02 22:34:44
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 西瓜斑斑辛苦 2012-08-03 13:56:17
盖子的设置跟普通PCR时一样就可以了，目的是相同的：防止蒸发。
我们实验室是ABI的PCR仪，盖子温度不用设，都是105度。另有一台需要单独设置盖子温度的，我们一般设成99度。两台我都用来做过反转录，很ok。
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8楼2012-08-02 23:10:10
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
另外，盖子的温度是不影响管子的温度的，它们的加热模块是分开的，所以不用担心105度的盖子会影响到管子的温度哈。
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9楼2012-08-02 23:11:34
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yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-08-02 23:10:10
盖子的设置跟普通PCR时一样就可以了，目的是相同的：防止蒸发。
我们实验室是ABI的PCR仪，盖子温度不用设，都是105度。另有一台需要单独设置盖子温度的，我们一般设成99度。两台我都用来做过反转录，很ok。

我是2步法做的，先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。
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10楼2012-08-03 00:09:20
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