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yqs129219

新虫 (小有名气)

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[求助] 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。

做反转录CDNA的时候要求42度30分钟，85度5分钟，在pcr仪上进行的话要不要设置盖子的温度，105度盖子温度会不会高，这个只做反转录，没有进行扩增

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1楼 2012-08-02 20:58:20

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引用回帖:

8楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-08-02 23:10:10
盖子的设置跟普通PCR时一样就可以了，目的是相同的：防止蒸发。
我们实验室是ABI的PCR仪，盖子温度不用设，都是105度。另有一台需要单独设置盖子温度的，我们一般设成99度。两台我都用来做过反转录，很ok。

我是2步法做的，先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。