应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。
291/3返回列表123下一页
查看: 7297  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yqs129219

新虫 (小有名气)

[求助] 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。

做反转录CDNA的时候要求42度30分钟，85度5分钟，在pcr仪上进行的话要不要设置盖子的温度，105度盖子温度会不会高，这个只做反转录，没有进行扩增
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-02 20:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-03 13:55:45
你说的这个我们当时做的时候还真的没有注意，不过当时我们没有管盖子的温度，后面反转录CDNA没有影响，你做PCR的时候盖子的温度也很高，你的退火温度有的也是五六十度的吧……
赞一下 回复此楼
上班族，学习ing……
2楼2012-08-02 21:09:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-08-02 21:09:04
你说的这个我们当时做的时候还真的没有注意，不过当时我们没有管盖子的温度，后面反转录CDNA没有影响，你做PCR的时候盖子的温度也很高，你的退火温度有的也是五六十度的吧……

扩增的时候盖子的温度是要105度防止挥发，现在只在pcr仪上做个反转录，也不知道要不要设盖子温度
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-02 21:17:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-02 21:17:27
扩增的时候盖子的温度是要105度防止挥发，现在只在pcr仪上做个反转录，也不知道要不要设盖子温度...

我们当时也是在PCR仪上做的反转，盖子温度没有管，还是原来PCR的温度，只是改了后面反转的温度和事件条件
赞一下 回复此楼
上班族，学习ing……
4楼2012-08-02 21:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-08-02 21:32:42
我们当时也是在PCR仪上做的反转，盖子温度没有管，还是原来PCR的温度，只是改了后面反转的温度和事件条件...

那就还是105度没有改了，做扩增的时候是要盖子温度要不会挥发了，扩增时间长一点
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-02 21:35:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只要热盖温度比管内溶液温度高就OK了，只要你的程序中没有超过70℃的温度循环，你甚至可以设置为70℃
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-02 22:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangtianyuan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
盖子的温度没有关系，它是一个热传导的过程的。
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-02 22:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 西瓜斑斑辛苦 2012-08-03 13:56:17
盖子的设置跟普通PCR时一样就可以了，目的是相同的：防止蒸发。
我们实验室是ABI的PCR仪，盖子温度不用设，都是105度。另有一台需要单独设置盖子温度的，我们一般设成99度。两台我都用来做过反转录，很ok。
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-02 23:10:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
另外，盖子的温度是不影响管子的温度的，它们的加热模块是分开的，所以不用担心105度的盖子会影响到管子的温度哈。
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-02 23:11:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-08-02 23:10:10
盖子的设置跟普通PCR时一样就可以了，目的是相同的：防止蒸发。
我们实验室是ABI的PCR仪，盖子温度不用设，都是105度。另有一台需要单独设置盖子温度的，我们一般设成99度。两台我都用来做过反转录，很ok。

我是2步法做的，先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-03 00:09:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yqs129219 的主题更新
291/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 14/700 2026-03-20 09:30 by kkcoco25
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +3 Charlieyq 2026-03-19 3/150 2026-03-20 08:53 by xingguangj
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 6/300 2026-03-18 10:21 by kkcoco25
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭