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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
之前木有注意，就和平常PCR一样，结果都没有影响.
希望对你有帮助~
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21楼2012-08-03 21:40:49
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sjjsy7

银虫 (小有名气)
还是设一下好！！
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22楼2012-08-03 23:21:25
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
盖子的温度一般都不管   95-100度之间
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快乐奋斗，创造所有。
23楼2012-08-04 00:21:04
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zdd1219815

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by yangjianchen at 2012-08-03 17:10:32
哦，可能各个公司试剂盒要求不一样吧，我一般是37度合成第一链。。。用dT和随机引物...

啊咧？我们为什么都是42度？
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24楼2013-07-08 20:46:28
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

要热盖子啊，不然还是有点蒸发的~
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25楼2013-07-08 21:42:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

必须设置热盖，理论上讲，只要盖子的温度比加热的最高温度高一点就行了，或者你也可以直接使用做PCR时默认的顶盖温度。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
26楼2013-07-09 15:00:01
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

42度反转录,一般是要设定热盖温度的,不然可能会使反转录体系挥发并凝结在管盖上. 如果是42度来做反应,60度热盖就足够了.105度热盖也可以.盖子和溶液之间距离还是比较大的,不用担心之间会有热交换而影响反转录体系.后面的85度是来失活转录酶的,应该是要用99或者105度热盖了.个人感觉这一步做不做都无所谓,呵呵.
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27楼2013-07-09 15:30:18
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 11:12:40
反转录试剂盒上这么写的，用的引物是dt18...

可能大家用的dT长短不一样吧，我之前用宝生物的都是37°进行反转录，效果一直很稳定。
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28楼2013-07-10 22:43:33
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我做反转没有设盖子温度，我做完后对我的CDNA没有影响的
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29楼2013-07-10 23:02:36
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