应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录要求42度30分钟，85 度5分钟，如果在pcr仪上进行，盖子的温度要不要设置。
292/3返回列表上一页123下一页
查看: 7187  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 00:09:20
我是2步法做的，先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。...

可以的
回复此楼
11楼2012-08-03 01:02:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 00:09:20
我是2步法做的，先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。...

热盖温度和什么PCR没有太大关系，不管你做一步还是两步PCR，热盖只为防止蒸发
赞一下 回复此楼
12楼2012-08-03 08:47:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
13楼2012-08-03 08:56:40
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-03 08:47:08
热盖温度和什么PCR没有太大关系，不管你做一步还是两步PCR，热盖只为防止蒸发...

只是在上面做RNA反转录成CDNA而已，这个热盖也没影响吧
赞一下 回复此楼
14楼2012-08-03 09:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-08-03 08:56:40
没关系，我以前设定，现在不设定了，都没问题。

是在PCR仪器上做RNA反转录成CDNA不进行扩增，这样热盖也没多大关系吧
赞一下 回复此楼
15楼2012-08-03 09:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 09:30:20
只是在上面做RNA反转录成CDNA而已，这个热盖也没影响吧...

没问题的，我们也是用的两步法做的，反转录在普通PCR仪上，热盖都用的预设的，有时99度，有时106度
赞一下 回复此楼
16楼2012-08-03 09:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是没关系的，我们都是102度的。还有两步法为什么用42度呢？你用特异引物了？
赞一下 回复此楼
17楼2012-08-03 09:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by yangjianchen at 2012-08-03 09:40:03
应该是没关系的，我们都是102度的。还有两步法为什么用42度呢？你用特异引物了？

反转录试剂盒上这么写的，用的引物是dt18
赞一下 回复此楼
18楼2012-08-03 11:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 11:12:40
反转录试剂盒上这么写的，用的引物是dt18...

哦，可能各个公司试剂盒要求不一样吧，我一般是37度合成第一链。。。用dT和随机引物
赞一下 回复此楼
19楼2012-08-03 17:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
preheat lid 105C是标准，但其目的就是为了防挥发而已，如果不想设，加点矿物油也是可行的。
赞一下 回复此楼
20楼2012-08-03 19:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yqs129219 的主题更新
292/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭