24小时热门版块排行榜    

查看: 7187  |  回复: 28

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 00:09:20
我是2步法做的,先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。...

可以的
11楼2012-08-03 01:02:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 00:09:20
我是2步法做的,先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。...

热盖温度和什么PCR没有太大关系,不管你做一步还是两步PCR,热盖只为防止蒸发
12楼2012-08-03 08:47:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
13楼2012-08-03 08:56:40
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yqs129219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-03 08:47:08
热盖温度和什么PCR没有太大关系,不管你做一步还是两步PCR,热盖只为防止蒸发...

只是在上面做RNA反转录成CDNA而已,这个热盖也没影响吧
14楼2012-08-03 09:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-08-03 08:56:40
没关系,我以前设定,现在不设定了,都没问题。

是在PCR仪器上做RNA反转录成CDNA不进行扩增,这样热盖也没多大关系吧
15楼2012-08-03 09:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 09:30:20
只是在上面做RNA反转录成CDNA而已,这个热盖也没影响吧...

没问题的,我们也是用的两步法做的,反转录在普通PCR仪上,热盖都用的预设的,有时99度,有时106度
16楼2012-08-03 09:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是没关系的,我们都是102度的。还有两步法为什么用42度呢?你用特异引物了?
17楼2012-08-03 09:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yangjianchen at 2012-08-03 09:40:03
应该是没关系的,我们都是102度的。还有两步法为什么用42度呢?你用特异引物了?

反转录试剂盒上这么写的,用的引物是dt18
18楼2012-08-03 11:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 11:12:40
反转录试剂盒上这么写的,用的引物是dt18...

哦,可能各个公司试剂盒要求不一样吧,我一般是37度合成第一链。。。用dT和随机引物
19楼2012-08-03 17:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
preheat lid 105C是标准,但其目的就是为了防挥发而已,如果不想设,加点矿物油也是可行的。
20楼2012-08-03 19:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yqs129219 的主题更新
信息提示
请填处理意见