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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 00:09:20
我是2步法做的,先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。...

可以的
11楼2012-08-03 01:02:01
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
10楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 00:09:20
我是2步法做的,先反转录CDNA再用自己设计的引物进行PCR的。不知道你做的跟我的一不一样。...

热盖温度和什么PCR没有太大关系,不管你做一步还是两步PCR,热盖只为防止蒸发
12楼2012-08-03 08:47:08
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匿名

用户注销 (正式写手)

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本帖仅楼主可见
13楼2012-08-03 08:56:40
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yqs129219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-03 08:47:08
热盖温度和什么PCR没有太大关系,不管你做一步还是两步PCR,热盖只为防止蒸发...

只是在上面做RNA反转录成CDNA而已,这个热盖也没影响吧
14楼2012-08-03 09:30:20
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yqs129219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-08-03 08:56:40
没关系,我以前设定,现在不设定了,都没问题。

是在PCR仪器上做RNA反转录成CDNA不进行扩增,这样热盖也没多大关系吧
15楼2012-08-03 09:31:08
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 09:30:20
只是在上面做RNA反转录成CDNA而已,这个热盖也没影响吧...

没问题的,我们也是用的两步法做的,反转录在普通PCR仪上,热盖都用的预设的,有时99度,有时106度
16楼2012-08-03 09:37:39
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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应该是没关系的,我们都是102度的。还有两步法为什么用42度呢?你用特异引物了?
17楼2012-08-03 09:40:03
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yqs129219

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yangjianchen at 2012-08-03 09:40:03
应该是没关系的,我们都是102度的。还有两步法为什么用42度呢?你用特异引物了?

反转录试剂盒上这么写的,用的引物是dt18
18楼2012-08-03 11:12:40
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-08-03 11:12:40
反转录试剂盒上这么写的,用的引物是dt18...

哦,可能各个公司试剂盒要求不一样吧,我一般是37度合成第一链。。。用dT和随机引物
19楼2012-08-03 17:10:32
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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preheat lid 105C是标准,但其目的就是为了防挥发而已,如果不想设,加点矿物油也是可行的。
20楼2012-08-03 19:29:51
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