应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR目的条带浅，测序回来不对
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 5070  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cherry--

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 菌落PCR目的条带浅，测序回来不对 已有3人参与

菌落PCR有目的条带但是很浅，送去测序回来与自己序列比对不上，到ncbi中blast后同源性都是果蝇等昆虫类的物种，不知是哪步出了问题，求大神帮助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-07 12:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sh_9153

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+1, ★有帮助 2015-04-07 18:03:28
菌落PCR本来就是一个相对的验证结果，以便于自己缩小验证范围，不能保证100%准确，测序结果不正确，在你确定自己测序引物特异性和正确性的前提下，证明自己构建有问题
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-07 13:50:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

兑换贵宾

小虫

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+1 2015-04-07 18:03:39
既然自己到blast上比对过了是正确的了，说明是测序出问题了吧。。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-04-07 13:56:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+2 2015-04-07 18:03:54
菌P不亮多半就是假阳性的了，拿提的质粒双酶切试一试能切开再送去测序

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
天道酬勤
4楼2015-04-07 16:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherry--

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-07 13:56:37
既然自己到blast上比对过了是正确的了，说明是测序出问题了吧。。

比对不是正确的，我的基因是软体动物里的基因
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-07 17:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherry--

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-04-07 16:58:02
菌P不亮多半就是假阳性的了，拿提的质粒双酶切试一试能切开再送去测序

什么是假阳性呀，如果是载体自连就不会p出条带，若是目的基因导进去怎么会涨菌呢？
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-07 18:08:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-08 09:33:38
cherry--: 金币+1, ★★★很有帮助, 明白了 太感谢了 我又重新做了一次把很亮的送去测序 这回比对上了 2015-04-08 10:16:23
引用回帖:
6楼: Originally posted by cherry-- at 2015-04-07 18:08:47
什么是假阳性呀，如果是载体自连就不会p出条带，若是目的基因导进去怎么会涨菌呢？...

你在涂板的时候会把没有连上的片段也涂在培养基表面，这样挑菌做PCR的时候自然也是能够P出条带来的，所以一般是选取菌落pcr高亮的摇菌提质粒，然后双酶切再验证一下，因为你连上目的基因那一定也是能再切出来的，再送测序这样把握更大一些

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
天道酬勤
7楼2015-04-07 18:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ladtalent

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
不亮的话九成九是假阳性，如果成功插入的话随便P一下都很亮的
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-09 12:57:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjasaa

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
菌落PCR同时带上阳性对照和阴性对照，可以稍微避免一些假阳性，同时能自己小提质粒酶切验证就更好了。
赞一下 回复此楼
WWW.ABMGOOD.COM
9楼2015-04-10 16:08:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cherry-- 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-04-01 4/200 2026-04-01 11:27 by wangjy2002
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +15 Doleres 2026-03-31 16/800 2026-04-01 09:49 by lfj11
[考研] 324分 085600材料与化工 +13 呆鹅oor 2026-03-27 13/650 2026-04-01 09:42 by jp9609
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考研] 070300化学354求调剂 +15 101次希望 2026-03-28 15/750 2026-03-31 17:58 by jp9609
[考研] 290分调剂求助 +10 吉祥止止陈 2026-03-25 10/500 2026-03-31 17:54 by 544594351
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[考研] 理学07化学 303求调剂 +8 睿08 2026-03-27 8/400 2026-03-31 16:31 by 690616278
[考研] 材料科学与工程调剂 +13 深V宿舍吧 2026-03-30 14/700 2026-03-31 16:28 by hypershenger
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +8 redcom 2026-03-29 8/400 2026-03-31 15:53 by niuailing
[考研] 本科211安全工程，初试290分，求调剂 +3 2719846834 2026-03-28 3/150 2026-03-31 13:52 by 热情沙漠
[考研] 085601材料工程找调剂 +17 oatmealR 2026-03-29 18/900 2026-03-30 19:21 by Wang200018
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 一志愿吉大071010，316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭