应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR目的条带浅，测序回来不对
51/1返回列表
查看: 5234  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cherry--

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR目的条带浅，测序回来不对 已有3人参与

菌落PCR有目的条带但是很浅，送去测序回来与自己序列比对不上，到ncbi中blast后同源性都是果蝇等昆虫类的物种，不知是哪步出了问题，求大神帮助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-07 12:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-08 09:33:38
cherry--: 金币+1, ★★★很有帮助, 明白了 太感谢了 我又重新做了一次把很亮的送去测序 这回比对上了 2015-04-08 10:16:23
引用回帖:
6楼: Originally posted by cherry-- at 2015-04-07 18:08:47
什么是假阳性呀，如果是载体自连就不会p出条带，若是目的基因导进去怎么会涨菌呢？...

你在涂板的时候会把没有连上的片段也涂在培养基表面，这样挑菌做PCR的时候自然也是能够P出条带来的，所以一般是选取菌落pcr高亮的摇菌提质粒，然后双酶切再验证一下，因为你连上目的基因那一定也是能再切出来的，再送测序这样把握更大一些

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
天道酬勤
7楼2015-04-07 18:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+1, ★有帮助 2015-04-07 18:03:28
菌落PCR本来就是一个相对的验证结果，以便于自己缩小验证范围，不能保证100%准确，测序结果不正确，在你确定自己测序引物特异性和正确性的前提下，证明自己构建有问题
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-07 13:50:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+1 2015-04-07 18:03:39
既然自己到blast上比对过了是正确的了，说明是测序出问题了吧。。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-04-07 13:56:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cherry--: 金币+2 2015-04-07 18:03:54
菌P不亮多半就是假阳性的了，拿提的质粒双酶切试一试能切开再送去测序

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
天道酬勤
4楼2015-04-07 16:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +6 Lanmanbaby 2026-08-09 8/400 2026-08-09 16:24 by zhjj370
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +13 且听虎啸 2026-08-07 17/850 2026-08-09 15:08 by 天神眷顾
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭