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skeeterhuang

铁虫 (初入文坛)

[交流] pcr产物电泳后仅一个样品出现条带,求助 已有4人参与

提DNA后,测定浓度在20-100ng/ml,配置出PCR体系,跑电泳,只有Maker和一个样品有条带,其他的都无条带,样品是处理不同时间的铜绿微囊藻团聚物,有条带的是处理中间时间的,自己实在找不到原因,第一次做分子实验,请大家多多指教。

pcr产物电泳后仅一个样品出现条带,求助
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-10 22:43:52
期望值是什么?PCR反应条件如何?你唯一条带的大小对否?gel浓度多少?你上了多少样?

全部都没有描述,让大家猜么??

还有marker本就跑的不怎么样,你的marker总共就5条带么?
向钱看,向厚赚
3楼2015-03-10 10:27:37
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haze12344

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
再做几次看看吧,有时候可能是忘记加东西什么的。
生物你好
2楼2015-03-10 08:25:59
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-10 22:44:26
您好,看图大概也能一知半解了,marker跑的也不是很好(这说明胶的质量需要改进)。
除了一个条带,其他尽然连杂带都没有,所以最先考虑的是模板,模板是否已经降解了,模板提取了多长时间,保存条件是什么?引物暂时不考虑,等你出现条带之后在考虑是否为目的条带在考虑引物(个人建议,做实验一步一步来,先找出来为什么没有条带然后再考虑条带大小是否正确)。
然后,试剂问题,你所用的试剂是否已经过期或者因为保存不当失效,当然我不知道你做实验的情况,所以无论概率大小,我们都得说出来嘛,有的时候做不出来,恰恰就是最简单的道理,试剂问题,尤其是酶,分为不同种类,热启动Taq酶长片段高保真聚合酶,甚至超保真聚合酶等等,选择也是非常重要的。
希望找到问题所在,祝好运
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-03-10 11:20:58
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18945926953

铜虫 (小有名气)

可能是有污染

[ 发自小木虫客户端 ]
爱科学,爱生命.
5楼2015-03-11 20:49:28
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