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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr产物电泳后仅一个样品出现条带，求助
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skeeterhuang

铁虫 (初入文坛)

[交流] pcr产物电泳后仅一个样品出现条带，求助 已有4人参与

提DNA后，测定浓度在20-100ng/ml，配置出PCR体系，跑电泳，只有Maker和一个样品有条带，其他的都无条带，样品是处理不同时间的铜绿微囊藻团聚物，有条带的是处理中间时间的，自己实在找不到原因，第一次做分子实验，请大家多多指教。

pcr产物电泳后仅一个样品出现条带，求助
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1楼 2015-03-10 04:44:18
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haze12344

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
再做几次看看吧，有时候可能是忘记加东西什么的。
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生物你好
2楼2015-03-10 08:25:59
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-10 22:43:52
期望值是什么？PCR反应条件如何？你唯一条带的大小对否？gel浓度多少？你上了多少样？

全部都没有描述，让大家猜么？？

还有marker本就跑的不怎么样，你的marker总共就5条带么？
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向钱看，向厚赚
3楼2015-03-10 10:27:37
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-10 22:44:26
您好，看图大概也能一知半解了，marker跑的也不是很好（这说明胶的质量需要改进）。
除了一个条带，其他尽然连杂带都没有，所以最先考虑的是模板，模板是否已经降解了，模板提取了多长时间，保存条件是什么？引物暂时不考虑，等你出现条带之后在考虑是否为目的条带在考虑引物（个人建议，做实验一步一步来，先找出来为什么没有条带然后再考虑条带大小是否正确）。
然后，试剂问题，你所用的试剂是否已经过期或者因为保存不当失效，当然我不知道你做实验的情况，所以无论概率大小，我们都得说出来嘛，有的时候做不出来，恰恰就是最简单的道理，试剂问题，尤其是酶，分为不同种类，热启动Taq酶，长片段高保真聚合酶，甚至超保真聚合酶等等，选择也是非常重要的。
希望找到问题所在，祝好运
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-03-10 11:20:58
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18945926953

铜虫 (小有名气)
可能是有污染

[ 发自小木虫客户端 ]
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爱科学，爱生命.
5楼2015-03-11 20:49:28
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