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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关PBI121载体酶切的问题
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nico7

新虫 (初入文坛)

[交流] 关PBI121载体酶切的问题 已有2人参与

目前，我在构建载体，用到了PBI121这个载体，设计的酶切位点为xba1和sma1，但一直切不出来，想问下有做过的朋友你们的酶切体系是怎么样的，还有要注意的地方，谢谢了！！
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1楼 2015-03-04 22:00:57
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
takara的酶的话，两者可用T+BSA双酶切。
说说你的具体问题。
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2楼2015-03-05 15:11:18
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nico7

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-05 15:11:18
takara的酶的话，两者可用T+BSA双酶切。
说说你的具体问题。

我加了1.5x的T buffer和BSA，其他条件是20的体系，酶各1ul，10ul质粒，剩余水补齐。但是一直没有出来，只有一条模糊的带（目的基因大小位置），而且我也试了分别单酶切，两个酶切条带跑的比对照质粒快，而且在目的基因大小位置处也出现了带，现在不知道是怎么回事了？
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3楼2015-03-06 20:05:29
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holiday晓

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by nico7 at 2015-03-06 20:05:29
我加了1.5x的T buffer和BSA，其他条件是20的体系，酶各1ul，10ul质粒，剩余水补齐。但是一直没有出来，只有一条模糊的带（目的基因大小位置），而且我也试了分别单酶切，两个酶切条带跑的比对照质粒快，而且在目的 ...

你好，我也是用这两种酶进行酶切现在也是停滞在这一步，请问您成功了吗？有什么需要注意？我酶切出来，但是有拖尾，影响了下一步连接转化，现在又要重新开始，希望你能抽空给我解答解答。谢谢
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4楼2015-07-27 19:54:27
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