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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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nico7

新虫 (初入文坛)

[交流] 关PBI121载体酶切的问题 已有2人参与

目前,我在构建载体,用到了PBI121这个载体,设计的酶切位点为xba1和sma1,但一直切不出来,想问下有做过的朋友你们的酶切体系是怎么样的,还有要注意的地方,谢谢了!!
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
takara的酶的话,两者可用T+BSA双酶切。
说说你的具体问题。
2楼2015-03-05 15:11:18
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nico7

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-05 15:11:18
takara的酶的话,两者可用T+BSA双酶切。
说说你的具体问题。

我加了1.5x的T buffer和BSA,其他条件是20的体系,酶各1ul,10ul质粒,剩余水补齐。但是一直没有出来,只有一条模糊的带(目的基因大小位置),而且我也试了分别单酶切,两个酶切条带跑的比对照质粒快,而且在目的基因大小位置处也出现了带,现在不知道是怎么回事了?
3楼2015-03-06 20:05:29
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holiday晓

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by nico7 at 2015-03-06 20:05:29
我加了1.5x的T buffer和BSA,其他条件是20的体系,酶各1ul,10ul质粒,剩余水补齐。但是一直没有出来,只有一条模糊的带(目的基因大小位置),而且我也试了分别单酶切,两个酶切条带跑的比对照质粒快,而且在目的 ...

你好,我也是用这两种酶进行酶切现在也是停滞在这一步,请问您成功了吗?有什么需要注意?我酶切出来,但是有拖尾,影响了下一步连接转化,现在又要重新开始,希望你能抽空给我解答解答。谢谢
4楼2015-07-27 19:54:27
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