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lu12306

新虫 (初入文坛)

[求助] 半定量RT-PCR中的引物二聚体 已有2人参与

最近在做半定量RT-PCR,从cDNA中能批出目的基因和内参基因,但胶的下面会有引物二聚体。我想问一下做半定量RT-PCR实验是不是得要求没有引物二聚体?引物二聚体会影响结果吗?如果有影响是不是只能重新设计引物?谢谢大家的解答啦!
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momo12345678

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-01-07 11:29:16
同学,你能具体说说升到72度是个什么意思吗?只是简单的把pcr亿升到72度吗?需要把pcr体系在72度孵育一段时间吗?
...

楼主用的应该是热启动酶 我们也是需要将pcr仪预热升温到接近95℃按暂停 放样 开跑 如果不是热启动酶好像没有这个要求

发自小木虫Android客户端
9楼2016-02-29 17:31:17
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查看全部 9 个回答

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:43:31
有引物二聚体应该没什么关系,但还是应该尽量避免或者要很淡,建议PCR体系中引物可以减少试试
医学&统计学
2楼2015-01-04 15:48:27
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:43:34
我做的时候也是有大量的引物二聚体,比目的条带亮的多,但是应该不影响结果,所以没必要太担心,加油,祝好
我要让你的生活因为有我而更精彩
3楼2015-01-04 16:31:15
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lu12306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-01-04 15:48:27
有引物二聚体应该没什么关系,但还是应该尽量避免或者要很淡,建议PCR体系中引物可以减少试试

谢谢你的答复。我发现如果我在PCR仪升到72度以上再放样进去,引物二聚体会少很多。很开心!
4楼2015-01-05 10:55:11
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