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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lu12306

新虫 (初入文坛)

[求助] 半定量RT-PCR中的引物二聚体 已有2人参与

最近在做半定量RT-PCR,从cDNA中能批出目的基因和内参基因,但胶的下面会有引物二聚体。我想问一下做半定量RT-PCR实验是不是得要求没有引物二聚体?引物二聚体会影响结果吗?如果有影响是不是只能重新设计引物?谢谢大家的解答啦!
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:43:34
我做的时候也是有大量的引物二聚体,比目的条带亮的多,但是应该不影响结果,所以没必要太担心,加油,祝好
我要让你的生活因为有我而更精彩
3楼2015-01-04 16:31:15
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:43:31
有引物二聚体应该没什么关系,但还是应该尽量避免或者要很淡,建议PCR体系中引物可以减少试试
医学&统计学
2楼2015-01-04 15:48:27
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lu12306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-01-04 15:48:27
有引物二聚体应该没什么关系,但还是应该尽量避免或者要很淡,建议PCR体系中引物可以减少试试

谢谢你的答复。我发现如果我在PCR仪升到72度以上再放样进去,引物二聚体会少很多。很开心!
4楼2015-01-05 10:55:11
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lu12306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-01-04 16:31:15
我做的时候也是有大量的引物二聚体,比目的条带亮的多,但是应该不影响结果,所以没必要太担心,加油,祝好

谢谢你的鼓励!我还想问一下:1.我做不同组织的半定量,还需要摸索不同组织的最佳循环数吗? 2.同管扩增的话,是将PCR体系乘以2倍吗?3.我扩增的目的基因约1000bp,是不是太大?对结果有影响?有人建议做300-500bp的。这有硬性要求吗?4.你觉得我这个18SrRNA的最佳循环数应该是多少?怎么确定的?
半定量RT-PCR中的引物二聚体
18SRNA最佳循环数.PNG

5楼2015-01-05 11:34:45
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