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lu12306

新虫 (初入文坛)

[求助] 半定量RT-PCR中的引物二聚体 已有2人参与

最近在做半定量RT-PCR，从cDNA中能批出目的基因和内参基因，但胶的下面会有引物二聚体。我想问一下做半定量RT-PCR实验是不是得要求没有引物二聚体？引物二聚体会影响结果吗？如果有影响是不是只能重新设计引物？谢谢大家的解答啦！
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1楼 2014-12-29 21:34:44
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-01-04 15:48:27
有引物二聚体应该没什么关系，但还是应该尽量避免或者要很淡，建议PCR体系中引物可以减少试试

谢谢你的答复。我发现如果我在PCR仪升到72度以上再放样进去，引物二聚体会少很多。很开心！
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4楼2015-01-05 10:55:11
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:43:31
有引物二聚体应该没什么关系，但还是应该尽量避免或者要很淡，建议PCR体系中引物可以减少试试
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医学&统计学
2楼2015-01-04 15:48:27
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:43:34
我做的时候也是有大量的引物二聚体，比目的条带亮的多，但是应该不影响结果，所以没必要太担心，加油，祝好
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我要让你的生活因为有我而更精彩
3楼2015-01-04 16:31:15
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-01-04 16:31:15
我做的时候也是有大量的引物二聚体，比目的条带亮的多，但是应该不影响结果，所以没必要太担心，加油，祝好

谢谢你的鼓励！我还想问一下：1.我做不同组织的半定量，还需要摸索不同组织的最佳循环数吗？ 2.同管扩增的话，是将PCR体系乘以2倍吗？3.我扩增的目的基因约1000bp，是不是太大？对结果有影响？有人建议做300-500bp的。这有硬性要求吗？4.你觉得我这个18SrRNA的最佳循环数应该是多少？怎么确定的？
半定量RT-PCR中的引物二聚体
18SRNA最佳循环数.PNG
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5楼2015-01-05 11:34:45
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