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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切电泳图,大神指点一下 已有4人参与

这是我质粒双酶切后的电泳图,前三个条带是切后的样品,最后一个是原质粒,第一个marker是500bp的最大5000,第二个marker是1000bp的,我感觉酶切后的电泳条带和原质粒还是有区别的,为何后续连接导入还是没有阳性克隆?是酶切不行吗,还是连接有问题?

质粒双酶切电泳图,大神指点一下
C360_2014-12-16-19-57-29-995.jpg
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searush

铜虫 (初入文坛)

我最近也碰到类似情况  期待大神们的指点
学术研究
2楼2014-12-17 09:13:10
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by searush at 2014-12-17 09:13:10
我最近也碰到类似情况  期待大神们的指点

嗯,刚开始做,什么都得摸索,文献中的东西只能借鉴不能迷信

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-12-17 11:37:53
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
搂住做的是空质粒的双酶切?

[ 发自小木虫客户端 ]
我要让你的生活因为有我而更精彩
4楼2014-12-17 11:45:18
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2014-12-17 11:45:18
搂住做的是空质粒的双酶切?

对,就是原质粒酶切,切出来后再把片段连上去啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-12-17 12:39:52
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hajierlove

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
质粒质量高吗?双酶切体系有问题吗?buffer有问题吗?酶切时间建议长一点,过夜,在跑一个图看看
踏实
6楼2014-12-17 14:30:07
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

之前遇到类似的问题,后来解决啦,酶切质粒质量高一些,时间就一些,试试,你的未酶切质粒浓度太低,跑的图也不亮
踏实
7楼2014-12-17 14:31:18
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by hajierlove at 2014-12-17 14:31:18
之前遇到类似的问题,后来解决啦,酶切质粒质量高一些,时间就一些,试试,你的未酶切质粒浓度太低,跑的图也不亮

我没懂你的意思?能详细点说嘛?未酶切的质粒只是做个对比的呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2014-12-17 16:58:09
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hajierlove

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuwukang at 2014-12-17 16:58:09
我没懂你的意思?能详细点说嘛?未酶切的质粒只是做个对比的呀
...

未切的质粒跑出来是三条线,从上到下依次,开环,线性,超螺旋,你酶切彻底的话,可以明显看出,你酶切之后的是和第二条在一条线上。
踏实
9楼2014-12-17 19:42:02
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by hajierlove at 2014-12-17 19:42:02
未切的质粒跑出来是三条线,从上到下依次,开环,线性,超螺旋,你酶切彻底的话,可以明显看出,你酶切之后的是和第二条在一条线上。...

所以我这个原质粒跑的也不大对?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2014-12-17 21:09:34
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