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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切电泳图，大神指点一下
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切电泳图，大神指点一下 已有4人参与

这是我质粒双酶切后的电泳图，前三个条带是切后的样品，最后一个是原质粒，第一个marker是500bp的最大5000，第二个marker是1000bp的，我感觉酶切后的电泳条带和原质粒还是有区别的，为何后续连接导入还是没有阳性克隆？是酶切不行吗，还是连接有问题？

质粒双酶切电泳图，大神指点一下
C360_2014-12-16-19-57-29-995.jpg
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1楼 2014-12-16 23:27:43
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searush

铜虫 (初入文坛)
我最近也碰到类似情况  期待大神们的指点
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学术研究
2楼2014-12-17 09:13:10
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by searush at 2014-12-17 09:13:10
我最近也碰到类似情况  期待大神们的指点

嗯，刚开始做，什么都得摸索，文献中的东西只能借鉴不能迷信

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3楼2014-12-17 11:37:53
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)
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搂住做的是空质粒的双酶切？

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我要让你的生活因为有我而更精彩
4楼2014-12-17 11:45:18
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liuwukang

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2014-12-17 11:45:18
搂住做的是空质粒的双酶切？

对，就是原质粒酶切，切出来后再把片段连上去啊

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5楼2014-12-17 12:39:52
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
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质粒质量高吗？双酶切体系有问题吗？buffer有问题吗？酶切时间建议长一点，过夜，在跑一个图看看
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踏实
6楼2014-12-17 14:30:07
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
之前遇到类似的问题，后来解决啦，酶切质粒质量高一些，时间就一些，试试，你的未酶切质粒浓度太低，跑的图也不亮
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踏实
7楼2014-12-17 14:31:18
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hajierlove at 2014-12-17 14:31:18
之前遇到类似的问题，后来解决啦，酶切质粒质量高一些，时间就一些，试试，你的未酶切质粒浓度太低，跑的图也不亮

我没懂你的意思？能详细点说嘛？未酶切的质粒只是做个对比的呀

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8楼2014-12-17 16:58:09
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by liuwukang at 2014-12-17 16:58:09
我没懂你的意思？能详细点说嘛？未酶切的质粒只是做个对比的呀
...

未切的质粒跑出来是三条线，从上到下依次，开环，线性，超螺旋，你酶切彻底的话，可以明显看出，你酶切之后的是和第二条在一条线上。
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踏实
9楼2014-12-17 19:42:02
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hajierlove at 2014-12-17 19:42:02
未切的质粒跑出来是三条线，从上到下依次，开环，线性，超螺旋，你酶切彻底的话，可以明显看出，你酶切之后的是和第二条在一条线上。...

所以我这个原质粒跑的也不大对？

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10楼2014-12-17 21:09:34
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