应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？
91/1返回列表
查看: 2315  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？ 已有5人参与

请教各位，我在做western，我的目的蛋白是10kd，但曝光的条带与Marker比是58kd左右，也没背景，也没其他的带，条带还比较漂亮，我怎么才能知道这条带是否是我要的蛋白呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-10 00:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutianyu1208

铜虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:21:01
那肯定不是啊。你配的多大的胶，跑的时候是什么多少伏，转模是什么条件啊？不说清楚没法分析

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-11-10 08:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西昆仑

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:29
如果你一抗二抗没有加错且没有其他条带的话，按理说应该就是了，但你目的条带的位置和显出来的差别太大了。。。建议重新看一下你的目的条带的分子量以及marker的条带说明。
赞一下 回复此楼
欢迎同行交流
3楼2014-11-10 09:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:42
58kd是其他蛋白比较多的区段，楼主需谨慎。跟你的目的size差太多，很可能不是。
10kd很小，多load一些样品试试，再多加点一抗，注意别跑过了。。
祝好运啊
赞一下 回复此楼
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2014-11-10 11:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

593318518

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:49
形成多聚体也不是不可能或者蛋白与其他蛋白形成复合体。可以将条带cut下来送去做质谱测序
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-11-10 11:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qincaiyan615

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wutianyu1208 at 2014-11-10 08:01:42
那肯定不是啊。你配的多大的胶，跑的时候是什么多少伏，转模是什么条件啊？不说清楚没法分析

我用的是Tris- gly胶，分离胶15%，110v跑，浓缩胶5%，65V跑，转膜，稳流200mA,1h。后来听说，小分子蛋白用Tricine-SDS-PAGE跑胶效果好，就用了，但跑的还是58kd左右，很奇怪
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-11 00:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutianyu1208

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qincaiyan615 at 2014-11-11 00:16:06
我用的是Tris- gly胶，分离胶15%，110v跑，浓缩胶5%，65V跑，转膜，稳流200mA,1h。后来听说，小分子蛋白用Tricine-SDS-PAGE跑胶效果好，就用了，但跑的还是58kd左右，很奇怪...

分离胶多跑一会，把胶混匀。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-11 01:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qincaiyan615(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:16:14
做一个阴性对照，一个不应该有你的目的蛋白的对照，这样你就能知道那条带到底是非特异的条带还是真的你的条带。理论上来说蛋白大小不会差那么多，哪怕是有修饰，有蛋白聚合（变性了，理论上应该没有）。
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-11 04:03:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

差别也太大了，确定抗体买对了么？
赞一下 回复此楼
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
9楼2014-11-25 10:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qincaiyan615 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +4 Liwangman 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:01 by wang_dand
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 一志愿郑大070303，338分，求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭