应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？
91/1返回列表
查看: 2678  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？ 已有5人参与

请教各位，我在做western，我的目的蛋白是10kd，但曝光的条带与Marker比是58kd左右，也没背景，也没其他的带，条带还比较漂亮，我怎么才能知道这条带是否是我要的蛋白呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-10 00:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutianyu1208

铜虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:21:01
那肯定不是啊。你配的多大的胶，跑的时候是什么多少伏，转模是什么条件啊？不说清楚没法分析

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-11-10 08:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西昆仑

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:29
如果你一抗二抗没有加错且没有其他条带的话，按理说应该就是了，但你目的条带的位置和显出来的差别太大了。。。建议重新看一下你的目的条带的分子量以及marker的条带说明。
赞一下 回复此楼
欢迎同行交流
3楼2014-11-10 09:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:42
58kd是其他蛋白比较多的区段，楼主需谨慎。跟你的目的size差太多，很可能不是。
10kd很小，多load一些样品试试，再多加点一抗，注意别跑过了。。
祝好运啊
赞一下 回复此楼
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2014-11-10 11:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

593318518

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:49
形成多聚体也不是不可能或者蛋白与其他蛋白形成复合体。可以将条带cut下来送去做质谱测序
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-11-10 11:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qincaiyan615

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wutianyu1208 at 2014-11-10 08:01:42
那肯定不是啊。你配的多大的胶，跑的时候是什么多少伏，转模是什么条件啊？不说清楚没法分析

我用的是Tris- gly胶，分离胶15%，110v跑，浓缩胶5%，65V跑，转膜，稳流200mA,1h。后来听说，小分子蛋白用Tricine-SDS-PAGE跑胶效果好，就用了，但跑的还是58kd左右，很奇怪
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-11 00:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutianyu1208

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qincaiyan615 at 2014-11-11 00:16:06
我用的是Tris- gly胶，分离胶15%，110v跑，浓缩胶5%，65V跑，转膜，稳流200mA,1h。后来听说，小分子蛋白用Tricine-SDS-PAGE跑胶效果好，就用了，但跑的还是58kd左右，很奇怪...

分离胶多跑一会，把胶混匀。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-11 01:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qincaiyan615(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:16:14
做一个阴性对照，一个不应该有你的目的蛋白的对照，这样你就能知道那条带到底是非特异的条带还是真的你的条带。理论上来说蛋白大小不会差那么多，哪怕是有修饰，有蛋白聚合（变性了，理论上应该没有）。
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-11 04:03:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

差别也太大了，确定抗体买对了么？
赞一下 回复此楼
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
9楼2014-11-25 10:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qincaiyan615 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 7/350 2026-08-25 03:24 by BZKMTicpDhFj
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭