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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？
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qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？ 已有5人参与

请教各位，我在做western，我的目的蛋白是10kd，但曝光的条带与Marker比是58kd左右，也没背景，也没其他的带，条带还比较漂亮，我怎么才能知道这条带是否是我要的蛋白呢？
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1楼 2014-11-10 00:01:57
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西昆仑

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:29
如果你一抗二抗没有加错且没有其他条带的话，按理说应该就是了，但你目的条带的位置和显出来的差别太大了。。。建议重新看一下你的目的条带的分子量以及marker的条带说明。
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欢迎同行交流
3楼2014-11-10 09:44:44
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wutianyu1208

铜虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:21:01
那肯定不是啊。你配的多大的胶，跑的时候是什么多少伏，转模是什么条件啊？不说清楚没法分析

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-11-10 08:01:42
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:42
58kd是其他蛋白比较多的区段，楼主需谨慎。跟你的目的size差太多，很可能不是。
10kd很小，多load一些样品试试，再多加点一抗，注意别跑过了。。
祝好运啊
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2014-11-10 11:00:45
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593318518

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:49
形成多聚体也不是不可能或者蛋白与其他蛋白形成复合体。可以将条带cut下来送去做质谱测序
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5楼2014-11-10 11:32:56
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